Question

10．為了從泡菜汁中篩選分離出發酵產酸速度快、亞硝酸鹽降解能力強的乳酸菌，科研人員做了如下實驗．請回答問題：
（1）在無菌操作下，使用無菌水對泡菜汁進行梯度稀釋，將不同稀釋度的泡菜汁涂布于添加了CaCO₃的乳酸細菌培養基（MRS培養基）平板上．在適宜條件下培養后，挑取有透明圈的菌落，繼續在MRS平板上用平板劃線法分離，得到單菌落．
（2）取分離到的乳酸菌接入MRS液體培養基中，間隔取樣測定pH，目的是篩選出產酸速度較快的乳酸菌．
（3）取上一步篩選出的乳酸菌接入含有NaNO₂的MRS培養基中，培養一段時間后，測定NaNO₂的含量，依據的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸結合形成玫瑰紅色染料，將顯色反應后的樣品與比較，篩選出降解能力強的菌株．
（4）乳酸菌細胞結構的最主要特點是沒有核膜包圍的細胞核，其代謝類型為異養厭氧型．

Answer 1

分析 泡菜發酵的實驗原理：
（1）乳酸菌在無氧條件下，將糖分解為乳酸．
（2）利用乳酸菌制作泡菜的過程中會引起亞硝酸鹽的含量的變化．
溫度過高，食鹽用量不足10%、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加．一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降．
（3）測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標準顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量．

解答 解：（1）首先對泡菜汁進行梯度稀釋才能形成不同稀釋度的泡菜汁，因為在加入CaCO₃的MRS培養基中，菌落周圍能形成透明圈所以要挑去有透明圈的菌落，然后用平板劃線法分離提純．
（2）從功能上該培養基是鑒別培養基，想要的目的菌是產酸速度快，亞硝酸鹽降解能力強的菌種，故測定pH是篩選出產酸速度較快的乳酸菌．
（3）在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標準顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量．亞硝酸鹽的測定用比色法，測定前需要配備標準顯色液，故篩選的是亞硝酸鹽降解能力強的菌株．
（4）乳酸菌是原核生物最主要的特點是沒有核膜包圍的細胞核，它是異養厭氧型生物．
故答案為
（1）梯度稀釋    透明圈    平板劃線
（2）產酸速度較快
（3）鹽酸酸化      玫瑰紅     降解能力強
（4）沒有核膜包圍的細胞核    異養厭氧型

點評 本題考查泡菜的制作，對于此類試題，需要考生識記參與泡菜制作的微生物及其代謝類型，掌握泡菜制作的原理及條件，能理論聯系實際，運用所學的知識合理解釋生活中的生物學問題．