Question

17．某實驗小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設計實驗步驟如下，請給予合理的補充．
（1）采樣與培養：將采集的土樣混勻后稱取1g，置于經過高壓蒸汽滅菌法滅菌處理的液體培養基中，28℃振蕩培養．
（2）接種與選擇：為避免培養液中菌體濃度過高，需將培養液進行系列稀釋（或“梯度稀釋”）處理．之后，將菌液涂布接種于以淀粉為唯一碳源的固體培養基上，30℃條件下培養．為了讓結果更準確，往往每組都要涂布3個平板，這遵循了平行重復原則．此外，為排除其他因素的影響，提高實驗可信度，本步驟需設計未接種的空白培養基（或“接種等量無菌水的培養基”）作為空白對照．
（3）篩選與純化：將適量的碘液滴加在平板中的菌落周圍，如果菌落周圍的現象是出現透明圈，則說明此種菌能夠分泌淀粉酶使淀粉發生水解．

Answer 1

分析 1、從土壤中分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株．
2、培養基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，富集培養可以使用液體培養基．
3、選擇培養基是指通過培養混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養基上是不能生存的．如篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌必須使用以淀粉為唯一碳源的選擇培養基．

解答 解：（1）對培養基進行滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法．
（2）為避免培養液中菌體濃度過高，需將培養液進行系列稀釋處理．要篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，應該將菌液涂布接種于以淀粉為唯一碳源的固體培養基上，30℃條件下培養．為了讓結果更準確，往往每組都要涂布3個平板，這遵循了平行重復原則．此外，為排除其他因素的影響，提高實驗可信度，本步驟需設計未接種的空白培養基（或“接種等量無菌水的培養基”）作為空白對照．
（3）若此種菌能分泌淀粉酶使淀粉發生水解，則將適量的碘液滴加在平板中的菌落周圍后，菌落周圍應該會出現透明圈．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌
（2）系列稀釋（或“梯度稀釋”）　淀粉　平行重復　未接種的空白培養基（或“接種等量無菌水的培養基”）
（3）出現透明圈　分泌淀粉酶使淀粉發生水解

點評 本題考查微生物的分離和培養，要求考生識記無菌技術，掌握不同的滅菌方法，能在不同情況下選擇合理的滅菌方法；識記實驗室分離微生物的方法，能根據要求完善實驗步驟，屬于考綱識記和理解層次的考查．