Question

（11分）目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質粒，則C表示        。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質粒。能形成重組質粒的原因是_______________________________________________________________________

 (4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是_______，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環素的抗性基因。

 

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質粒X－1混合連接，連接后獲得的質粒類型有＿＿＿。（可多選）A．X－1  B．X－2   C．X－3   D．X－4

 

Answer 1

【答案】

（11分） (1)篩選(鑒別目的基因是否導入受體細胞)   重組質粒　

(2)

(3) DNA連接酶  磷酸二酯　兩種限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同   （或 兩者結構上相似，有互補的堿基序列）

(4) amp^R和tet^R（或氨芐青霉素抗性基因和四環素抗性基因）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環素 pBR322 質粒（5）特異性識別和切割DNA＿＿。ABC

【解析】略