Question

目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構建的質(zhì)粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。說明____________________________________________________。

(4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是____________，圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是________________。

Answer 1

 (1)篩選(鑒別目的基因是否導入受體細胞)

(2)

(3)磷酸二酯　兩種限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同

(4)能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素　pBR322 質(zhì)粒