Question

下表為幾種限制性核酸內切酶識別的序列和切割的位點．如圖，已知某DNA在目的基因的兩端1、2、3、4四處分別有BamHⅠ，EcoRⅠ，BamHⅠ，PstⅠ的酶切位點．假設所用的酶均可將識別位點完全切開，為防止酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環狀，應選用的酶是（　　）

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ
識別序列和切割位點

• A、用BamHⅠ酶切
• B、用EcoRⅠ酶切
• C、用BamHⅠ，EcoRⅠ酶切
• D、用BamHⅠ，EcoRⅠ，PstⅠ酶切

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：由于限制酶具有特異性，一種限制酶只能識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并形成特定的黏性末端．題干中提出“為防止酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環狀”，即要求目的基因兩側的黏性末端不同，因此一般選擇不同的限制酶進行切割．

解答： 解：A、BamHⅠ酶在目的基因的1處和3處有切割位點，因此目的基因兩端將被切割成相同的黏性末端，這將會導致自身環化，A錯誤；
B、EcoRⅠ酶只在目的基因的2處有切割位點，只用這一種酶無法切割目的基因，B錯誤；
C、表格中可以看出，BamHⅠ酶和EcoRⅠ酶識別序列和切割位點不同，并且EcoRⅠ酶的切割位點在2處，即兩種酶處理后目的基因的2處和3處被切割，并形成不同的黏性末端，可以防止目的基因自身環化，C正確；
D、PstⅠ酶的切割位點在4處，即不影響BamHⅠ酶3處的切割位點，因此用這三種酶處理后，目的基因仍在2處和3處被切割，因此可以防止目的基因的自身環化，D正確．
故選：CD．

點評：本題具有一定的難度，屬于考綱中理解層次的要求，著重考查了限制酶的特點及應用，在基因工程中，一般為防止質粒或目的基因自身環化，一般選擇不同的限制酶分別切割目的基因和質粒，以形成不同的黏性末端．