Question

18．由于人突變細胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細胞均不能在HAT培養基中生長，但可在普通培養基中生長．利用上述兩類細胞融合獲得雜種細胞，在雜種細胞傳代過程中，鼠的染色體被保留下來，人的染色體隨機丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如圖，圖中數字代表保留的人染色體編號）．科研人員運用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體．分析回答：

（1）與植物原生質融合過程相比，過程A特有的誘導方法是用滅活的病毒處理．
（2）動植物細胞培養過程中，培養液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養箱中充入5…的CO₂氣體的主要作用是維持培養液適宜的pH．
（3）若細胞兩兩融合，則會出現3種類型的融合細胞，過程B用HAT培養基進行培養，其目的是篩選出人鼠融合細胞（或“雜種細胞”）．
（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應在普通（填“HAT”或“普通”）培養基中傳代培養．為檢查雜種細胞中含有的人染色體數目和形態，最好選取有絲分裂中期（時期）的雜種細胞進行觀察．
（5）若將某次實驗獲得的各種人鼠雜種細胞分別在HAT培養基中培養，一段時間后，發現在HAT培養基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，檢查雜種細胞中保留的人染色=體情況如下表（表中“+”表示有相應染色體，“-”表示無相應染色體）：

雜種細胞	保留的人染色體
	2號	3號	5號	9號	12號	17號	21號
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根據表中信息，可推測人細胞中胸苷激酶基因位于17號染色體上．

Answer 1

分析 1、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較：

項目	細胞融合原理	細胞融合方法	誘導手段	用途
植物體細胞雜交	細胞膜的流動性，（細胞的全能性）	去除細胞壁后誘導原生質體融合	離心、電刺激、聚乙二醇等試劑誘導	克服遠緣雜交不親和，獲得雜交植株
動物細胞融合	細胞膜的流動性	使細胞分散后，誘導細胞融合	離心、電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導	制備單克隆抗體的技術之一

2、動物細胞培養的條件：
（1）無菌、無毒的環境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養液，以清除代謝廢物．
（2）營養物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養液的PH）．
3、分析表格：A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體．

解答 解：（1）植物原生質體融合的誘導方法有物理法和化學法，而誘導動物細胞融合的方法有物理法、化學法和生物法，因此與植物原生質體融合過程相比，過程A特有的誘導方法是生物法，即用滅活的病毒處理．
（2）動物細胞培養過程中，培養液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是維持培養液適宜的pH．
（3）若細胞兩兩融合，則會出現3種類型的融合細胞，即人細胞自身融合的細胞、小鼠細胞自身融合的細胞和人鼠細胞融合形成的雜種細胞；過程B用HAT培養基進行培養，目的是篩選出人鼠融合細胞（雜種細胞）．
（4）突變細胞和正常細胞都不能在HAT培養基上生長，但都能在普通培養基上生長，因此為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應在普通培養基中傳代培養．有絲分裂中期，細胞中染色體形態穩定、數目清晰，是觀察染色體形態和數目的最佳時期．
（5）在HAT培養基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，而A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體，據此可推知人細胞中胸苷激酶基因位于17號染色體上．
故答案為：
（1）用滅活的病毒處理
（2）防止雜菌污染    維持培養液適宜的pH
（3）3    篩選出人鼠融合細胞（或“雜種細胞”）
（4）普通   有絲分裂中期
（5）17

點評 本題結合圖表，考查動物細胞工程的相關知識，要求考生識記動物細胞融合的方法，能對動植物細胞融合進行比較；識記動物細胞培養的條件，能結合圖表中信息準確答題．