Question

I．逆轉錄病毒載體是一種表達型質粒，結構如圖1所示．圖上的“逆轉錄病毒序列”可以整合到動物細胞的染色體上，不斷地表達其攜帶的目的基因．（E、F、H分別為限制酶E、F、H的酶切位點）．
（1）逆轉錄的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在構建重組質粒時，目的基因應插入到該質粒的位置是

 

，此過程需使用的酶是

 

．為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加

 

的培養基進行培養．獲取大量重組質粒后，將其再轉入到某種哺乳動物細胞中，可獲得大量重組逆轉錄病毒．
Ⅱ．圖2為培育轉基因小鼠基本過程的示意圖．請回答下列問題：
（3）如A為重組質粒溶液，將其導人原核期受精卵的方法是

 

；如A為重組逆轉錄病毒，還可采取

 

方法．
（4）小鼠出生后可從其尾巴提取

 

分子，通過

 

方法，可檢測出攜帶目的基因的小鼠．
（5）若目的基因進入細胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉基因純合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：據圖分析，基因表達載體的構建是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，基因工程載體的條件是能在受體細胞中保存并大量復制、有一至多了限制性內切酶切點和有特殊的遺傳標記基因，便于進行篩選．逆轉錄酶序列中有限制酶F的切割位點，目的基因與運載體結合，在粘性末端堿基互補配對，需要DNA連接酶作用于磷酸二酯鍵，形成重組DNA分子；該質粒上有具有的遺傳標記基因是抗生素A抗性基因，可以用加有抗生素A的選擇培養基進行篩選；目的基因進人細胞后插入在一條染色體DNA上，動物細胞可以讓轉基因雌雄小鼠間相互交配，逐代篩選．

解答： 解：（1）逆轉錄是以RNA為模板合成DNA的過程，所需要的模板為RNA，原料為四種脫氧核苷酸．
（2）基因工程需要工具酶是限制酶和DNA連接酶；用到的限制酶不能破壞標記基因（抗生素A抗性基因），且應該整合到“逆轉錄病毒序列”上；抗生素A抗性基因為標記基因，用來幫助篩選目的基因．
（3）用顯微注射技術將重組質粒溶液導人受精卵；如A為重組逆轉錄病毒，還可采取感染方法．
（4）小鼠出生后可從其尾巴提取DNA分子，通過DNA分子雜交方法，可檢測出攜帶目的基因的小鼠．
（5）目的基因進人細胞后插入在一條染色體DNA上，對應的同源染色體上無對應的等位基因；讓轉基因小鼠相互交配，就能獲得轉基因純合子小鼠．
故答案為：I（1）RNA     （四種）脫氧核苷酸
（2）F（逆轉錄病毒序列）     限制酶和DNA連接酶（缺一不得分）  抗生素
II（3）顯微注射（法）      感染（侵染）
（4）DNA    DNA分子雜交（或核酸分子雜交）
（5）轉基因小鼠間相互交配（或雜交）

點評：本題考查RNA復制，逆轉錄需要的模板、原料，重組質粒時目的基因的插入位點，DNA分子雜交技術的知識，意在考查學生識圖能力、信息的提取與應用能力、通過比較與綜合做出合理判斷的能力等．