Question

（2015秋•長春校級月考）為研究水稻D基因的功能，研究者將T﹣DNA插入到D基因中，致使該基因失活，失活后的基因記為d．現以野生植株和突變植株作為親本進行雜交實驗，統計母本植株的結實率，結果如下表所示．

雜交編號	親本組合	結實數/授粉的小花數	結實率
①	♀DD×♂dd	16/158	10%
②	♀dd×♂DD	77/154	50%
③	♀DD×♂DD	71/141	50%

（1）表中數據表明，D基因失活使 配子育性降低．為確定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可將 作為目的基因，與載體連接后，導入到 （填“野生”或“突變”）植株的幼芽經過 形成的愈傷組織中，最后觀察轉基因水稻配子育性是否得到恢復．

（2）用 觀察并比較野生植株和突變植株的配子形成，發現D基因失活不影響二者的 分裂．

（3）進一步研究表明，配子育性降低是因為D基因失活直接導致配子本身受精能力下降．若讓雜交①的F1給雜交②的F1授粉，預期結實率為 ，所獲得的F2植株的基因型及比例為 ．

（4）為驗證F2植株基因型及比例，研究者根據D基因、T﹣DNA的序列，設計了3種引物，如圖所示：

隨機選取F2植株若干，提取各植株的總DNA，分別用引物“Ⅰ+Ⅲ”組合及“Ⅱ+Ⅲ”組合進行PCR，檢測是否擴增（完整的T﹣DNA過大，不能完成PCR）．若 ，則相應植株的基因型為Dd；同理可判斷其他基因型，進而統計各基因型比例．

（5）研究表明D基因表達產物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在細胞核內．為探究D蛋白是否為核蛋白，研究者將D基因與黃色熒光蛋白基因融合；同時將已知的核蛋白基因與藍色熒光蛋白基因融合．再將兩種融合基因導入植物原生質體表達系統，如果 ，則表明D蛋白是核蛋白．

Answer 1