Question

4．基因工程中，需要使用限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-．
（1）根據已知條件和圖回答下列問題：
①上述質粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割．
②將切下的目的基因片段插入質粒的切口處，還要加入適量的DNA連接酶．
③請指出質粒上至少要有一個標記基因的理由：檢測重組質粒（或目的基因）是否導入受體細胞．
（2）基因工程操作步驟的核心基因表達載體的構建
（3）檢測目的基因是否表達的方法抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 分析題圖：由于限制酶Ⅱ能識別限制酶Ⅰ的識別序列，限制酶Ⅰ不能識別限制酶Ⅱ的識別序列．要將目的基因從該DNA鏈中提取出來，需要在目的基因左右切開，所以要用限制酶Ⅱ；質粒不能用限制酶Ⅱ，否則會將兩個標記基因都給切割開．

解答 解：（1）①限制酶Ⅱ能識別限制酶Ⅰ的識別序列，限制酶Ⅰ不能識別限制酶Ⅱ的識別序列，要將目的基因從該DNA鏈中提取出來，需要在目的基因左右切開，所以要用限制酶Ⅱ；質粒要用限制酶Ⅰ切割，不能用限制酶Ⅱ切割，否則會將兩個標記基因都給切割開．
②將目的基因與質粒連接起來需要使用DNA連接酶．
③質粒上至少要有一個標記基因，目的是檢測重組質粒（或目的基因）是否導入受體細胞．
（2）基因工程操作步驟的核心是基因表達載體的構建．
（3）檢測目的基因是否表達常用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）①ⅠⅡ②DNA連接酶        ③檢測重組質粒（或目的基因）是否導入受體細胞
（2）基因表達載體的構建
（3）抗原-抗體雜交

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能結合所學的知識準確答題．