Question

8．羊奶中乳白蛋白含量很低，科研人員嘗試利用轉基因技術將人乳白蛋白基因導入羊胚胎的成纖維細胞核，進而培育轉基因克隆山羊．技術流程如下圖，據圖回答：

（1）圖中①過程中使用的酶有限制酶、DNA連接酶．
（2）圖中②過程使用的方法是顯微注射技術．將導入成功的細胞核注入到③去核卵母細胞（必須體現出無核）構成重組細胞，培養成早期胚胎，經圖中④胚胎移植技術可培育成轉基因克隆山羊．
（3）與預期結果相反，轉基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低．為探究其原因，研究人員從（轉基因克隆山羊）乳腺細胞細胞中提取總RNA，然后以同位素標記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作為探針進行分子雜交，結果發現沒有出現雜交帶．
（4）研究人員對上述現象的解釋：可能由于人乳白蛋白基因首端（首端、尾端）無啟動子，從而不能進行轉錄．推測要使該基因在山羊乳腺細胞中表達，須將它與山羊乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組起來，構建基因表達載體．

Answer 1

分析 分析圖解可知，圖中過程①表示基因表達載體的構建，過程②表示將目的基因導入受體細胞，③表示去核的卵母細胞，過程④表示胚胎移植．

解答 解：（1）圖中①過程表示基因表達載體的構建，該過程需要首先使用限制酶切割目的基因和運載體形成相同的黏性末端，然后再利用DNA連接酶構建重組質粒．
（2）一般將目的基因導入動物細胞運用顯微注射技術．將導入成功的細胞核注入到③去核卵母細胞構成重組細胞，培養成早期胚胎，經圖中④胚胎移植技術可培育成轉基因克隆山羊．
（3）與預期結果相反，轉基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低．為探究其原因，可以從（轉基因克隆山羊）乳腺細胞細胞中提取總RNA，然后以同位素標記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作為探針進行分子雜交，結果發現沒有出現雜交帶．
（4）轉基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低，可能由于人乳白蛋白基因首端無啟動子，從而不能進行轉錄．推測要使該基因在山羊乳腺細胞中表達，須將它與山羊乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組起來，構建基因表達載體．
故答案為：
（1）限制酶、DNA連接酶 
（2）顯微注射技術      去核卵母細胞（必須體現出無核）     胚胎移植
（3）（轉基因克隆山羊）乳腺細胞       同位素標記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段
（4）首端    山羊乳腺蛋白基因的啟動子

點評 本題以轉基因克隆山羊的培育過程為載體，考查了基因工程的有關知識，要求考生能夠識記基因工程的工具和操作步驟，識記基因表達載體的組成，明確啟動子和終止子在基因中的位置以及其生理作用．