Question

12．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質（S蛋白，對應的基因為S基因），請回答下列問題．
（1）在這項技術中，S基因屬于目的基因．為在短時間內大量獲得S基因，可用的技術是PCR技術，其原理是DNA雙鏈復制．
（2）用同種限制酶處理S基因和載體，并用DNA連接酶使之結合，這里的DNA片段兩兩結合的產物有3種，除了S基因，構建好的表達載體還應具有啟動子、終止子、標記基因等結構．
（3）將表達載體導入哺乳動物細胞，篩選得到工程細胞．使用合成培養基培養工程細胞時，通常需要加入動物血清等天然成分．工程細胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶繼續培養，在培養過程中，定期收集培養液，分離純化即可得到所需產品．
（4）由于哺乳動物細胞嬌嫩挑剔，培養較難，成本較高，近些年科學家們又發明了“乳腺生物發生器”，從飼養的轉基因動物分泌的乳汁中提取所需產品．在這種技術中，構建表達載體時需要將S基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起，并將表達載體通過顯微注射的方式，導入哺乳動物的受精卵（填細胞名稱）．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
由于基因的選擇性表達，在利用轉基因動物生產藥物時，要將藥用蛋白基因和乳腺組織特異性表達的啟動子等調控組件重組在一起．
動物細胞培養的培養基營養物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．
動物細胞培養關鍵詞辨析：
1、細胞貼壁：培養時，懸液中的細胞會很快貼附在瓶壁上．
2、細胞的接觸抑制：細胞表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖．

解答 解：（1）在基因工程技術中，S基因屬于目的基因．為在短時間內大量獲得S基因，可用的技術是PCR技術，其原理是DNA雙鏈復制．
（2）在基因表達載體構建的過程中，要用同一種限制酶處理S基因和運載體，并用DNA連接酶使之結合．由于目的基因和運載體均具有相同黏性末端，因此這里的DNA片段兩兩結合的產物有目的基因自身連接、運載體自身連接和重組質粒3種，除了S基因，構建好的表達載體還應具有啟動子、終止子、標記基因等結構．
（3）在對工程細胞進行動物細胞過程中，培養基中通常需要加入動物血清等天然成分．細胞在生長過程中有貼壁生長和接觸抑制現象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理使細胞分散，以便于分瓶繼續培養，在培養過程中，定期收集培養液，分離純化即可得到所需產品．
（4）由于哺乳動物細胞嬌嫩挑剔，培養較難，成本較高，近些年科學家們又發明了從飼養的轉基因動物分泌的乳汁中提取所需產品．在“乳腺生物發生器”的技術中，構建表達載體時需要將S基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起；一般動物細胞工程利用受精卵作為受體細胞，可以通過顯微注射法將表達載體導入受精卵．
故答案為：
（1）目的基因　PCR技術　DNA雙鏈復制
（2）同種限制酶　DNA連接酶　3　啟動子、終止子、標記基因
（3）動物血清　貼壁生長和接觸抑制　胰蛋白
（4）乳腺蛋白基因的啟動子　顯微注射　受精卵

點評 本題考查了基因工程以及細胞工程的相關知識，考生要識記基因工程的相關操作工具；識記動物細胞培養的培養基成分以及細胞培養的特點；識記動物基因工程的過程等相關知識，難度適中．