Question

14．如圖1是利用轉基因技術生產干擾素的簡化流程．請分析回答：
（1）過程①使用的限制酶酶能使特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵（化學鍵）斷開．運載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過堿基互補配對原則而結合． 過程②需要用到DNA連接酶．
（2）圖中A的名稱是重組質粒，A上應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動干擾素基因轉錄，該部位稱為啟動子．
（3）為直接檢測干擾素基因是否轉錄，可從細胞中提取RNA與用放射性同位素標記的目的基因作的探針進行分子雜交．
（4）利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據這一序列合成引物，除了該物質和目的基因外，擴增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合（Taq酶）酶，并適時調整溫度，才能使目的基因數量成指數式增長．
（5）在該工程中所用的基因“剪刀”能識別的序列和切點是-GGATCC-．請在圖2中畫出質粒被切割形成黏性末端的過程圖．

Answer 1

分析 分析圖1：圖中①過程表示利用同一種限制酶切割目的基因和質粒，以獲得相同的黏性末端；②過程表示利用DNA連接酶構建基因表達載體；③過程表示將目的基因導入受體細胞．

解答 解：（1）切割目的基因和質粒需用同一種限制性核酸內切酶．限制酶破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵；②是基因表達載體的構建過程，該過程還需要DNA連接酶將目的基因與質粒連接形成重組質粒．
（2）圖中A為重組質粒；驅動基因轉錄的結構是啟動子．
（3）檢測目的基因是否轉錄，可采用分子雜交技術，即從細胞中提取RNA與用放射性同位素標記的目的基因作探針進行分子雜交．
（4）利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據這一序列合成引物，除了該物質和目的基因外，擴增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和熱穩定DNA聚合酶，并適時調整溫度，才能使目的基因數量成指數式增長．
（5）黏性末端是兩條鏈，如圖：
-G′GATCC--G     GATCC-
-C CTAGG--CCTAG     G-
故答案為：
（1）限制酶   磷酸二酯鍵    DNA連接  
（2）重組質粒   啟動子
（3）RNA    分子雜交 
（4）引物   耐高溫的DNA聚合（Taq酶）
（5）-G′GATCC--G      GATCC-
-C CTAGG--CCTAG      G-

點評 本題結合利用利用轉基因技術生產干擾素的簡化流程，考查基因工程的技術及原理及應用，要求考生識記基因工程的原理及技術，能準確判斷圖中各過程的名稱，能運用所學的知識結合圖中信息準確判斷各題．