Question

圖為某種質(zhì)粒表到載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R 為四環(huán)素抗性基因，P啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。

據(jù)圖回答：

（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒該表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用ＤＮＡ連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有       、         、   

      三種 。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行        。

（2）用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉(zhuǎn)化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是         ；

（3）在上述實驗中，為了防止目的基因和基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是                。

Answer 1

（１）目的基因－載體連接物　　載體－載體連接物　目的基因－目的基因連接物　　　　分離純化（每空２分，共８分）

（２）載體－載體連接物（２分）　　目的基因－載體連接物（１分）　　載體－載體連接物（１分）

（３）啟動子　　mRNA (每空２分，共４分)

（４）EcoRI和BamHI（２分）（只答一個酶不給分）

解析:

考查基因表達載體的構(gòu)建的相關(guān)知識。

（1）連接酶連接黏性末端時，是不區(qū)分質(zhì)粒還是目的基因的，所以可產(chǎn)生目的基因—載體連接物、載體—載體連接物、目的基因—目的基因連接物。要想得到分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行分離純化。

（2）在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，因為酶切位點破壞四環(huán)素抗性基因tct^r，所以只有載體—載體連接產(chǎn)物才可能存在。含青霉素的培養(yǎng)基中，酶切位點沒有破壞青霉素抗性基因amp^r，只要含有目的基因—載體連接物、載體—載體連接物都可以生存。

（3）同時選用兩種酶之后，目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的黏性末端不相同，就不會發(fā)生任意鏈接。