Question

圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列．現有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d．從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有幾種不同DNA片段？若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，應選用哪種限制酶？（　　）

• A、4 MboⅠ
• B、3 MboⅠ
• C、4 BamHⅠ
• D、3 BamHⅠ

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：分析圖1：圖中DNA片段含有2個限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割位點，也含有兩個限制酶BamHⅠ和MboⅠ切割位點．基因D兩側序列為GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割．
分析圖2：質粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割．用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒有破環抗生素B抗性基因，因此含有重組質粒的大腸桿菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A．

解答： 解：基因D會被SmaⅠ切割形成三個片段（長度分別為537bp、790bp、661bp）；若圖中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，則基因D就突變為基因d，且基因d只有一個SmaⅠ的酶切位點，因而基因d會被SmaⅠ切割形成兩個片段（長度分別為1327bp、661bp）．所以，從雜合子（Dd）中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有4種不同長度的DNA片段（537bp、790bp、661bp、1327bp）．
限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會被破壞目的基因D；運載體的兩個標記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點，用該酶切割會破壞這兩個標記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和運載體．
故選：C．

點評：本題結合基因結構圖和運載體結構圖，考查基因工程的技術和原理，要求考生認真分析圖1和圖2，根據圖1中信息計算限制酶SmaⅠ切割產生的片段的種類及長度；根據圖1和圖2中限制酶的給切割位點，明確構建基因表達載體只能用限制酶BamHⅠ，再運用所學的知識答題即可．