Question

8．請回答下列有關基因工程的問題．
下表是基因工程中幾種限制酶識別序列及其切割位點．圖1是轉基因香蕉的培育過程，含目的基因的外源DNA和質粒上的箭頭表示相關限制酶的酶切位點．

限制酶	BamH I	Hind III	EooR I	Sma I
識別序列及切割位點

（1）從轉基因香蕉培育圖中反映了質粒作為運載體的特點是有多個酶切位點、有標記基因、能在宿主細胞內復制并穩定保存，基因工程中還可以用噬菌體或動植物病毒作為運載體．

（2）圖1中的質粒和目的基因構建重組質粒，不能使用SmaI酶切割，原因是SmaI酶會破壞目的基因和質粒
（3）圖2是用BamHⅠ和HindⅢ（限制）酶進行切割得到的目的基因．可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身環化．
（4）人體細胞內含有抑制癌癥發生的某基因，生物技術可對此類基因的變化進行檢測．該基因含有800對堿基對（bp），用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp，．用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，50bp，200bp．而患者體內獲取的這段基因，用BamHⅠ切割得到的區段變為400bp，400bp，用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，250bp．在正常人體內BamHⅠ和EcoRⅠ識別序列分別有2個和2個，患者體內發生了基因突變．
（5）下列有關基因工程的敘述錯誤的是ABD（多選）
A．質粒上的目的基因必須整合到受體細胞的DNA上才能不被分解
B．以蛋白質的氨基酸序列為依據合成的目的基因與原基因的堿基序列相同
C．沒有與目的基因重組的質粒也可以進入受體細胞
D．質粒上的抗生素抗性基因有利于質粒與外源基因連接．

Answer 1

分析 分析圖1：①表示基因表達載體的構建過程；②表示將重組質粒導入農桿菌；③表示采用農桿菌轉化法將目的基因導入香蕉組織細胞；④表示脫分化過程；⑤表示再分化過程．
分析圖2：根據圖1中DNA片段兩側的黏性末端可知，左側是用限制酶BamHI切割形成的，右側是用限制酶HindⅢ切割形成的．

解答 解：（1）質粒作為運載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點； ②要有標記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細胞中穩定存在并復制；④是安全的，對受體細胞無害，而且要易從供體細胞分離出來．基因工程中還可以用病毒（噬菌體或動植物病毒）作為運載體．
（2）質粒抗生素抗性基因為標記基因，由圖可知，標記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位點，都可以被SmaI酶破環，故不能使用該酶剪切質粒和含有目的基因的DNA．
（3）根據圖1中DNA片段兩側的黏性末端可知，左側是用限制酶BamHI切割形成的，右側是用限制酶HindⅢ切割形成的，這樣可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身環化．
（4）該基因用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp三種長度的DNA片段，說明在正常人體內BamHⅠ的識別序列有2個；用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp后，再用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，50bp，200bp，說明400bp被切割成100bp，300bp，其中一個200bp被切割成150bp，50bp，可見EcoRⅠ識別序列也有2個．患者體內獲取的這段基因，用BamHⅠ切割得到的區段變為400bp，400bp，用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，250bp，說明有一個BamHⅠ識別序列發生了基因突變，不能被BamHⅠ切割．
（5）A、用質粒作為運載體時，質粒上的目的基因不需要整合到受體細胞的DNA上，用病毒或噬菌體作為運載體時，目的基因需整合到受體細胞DNA上，A錯誤；
B、真核生物基因有編碼區和非編碼區之分，并且編碼區包括外顯子和內含子，而以蛋白質的氨基酸序列為依據合成的目的基因只包含外顯子，沒有內含子和非編碼序列，因此與原基因的堿基序列不同，B錯誤；
C、沒有與目的基因重組的普通質粒也可以進入受體細胞，C正確；
D、質粒上的抗生素抗性基因有利于檢測外源基因的導入，D錯誤．
故選：ABD．
故答案為：
（1）有多個酶切位點、有標記基因、能在宿主細胞內復制并穩定保存   噬菌體或動植物病毒
（2）SmaI酶會破壞目的基因和質粒
（3）BamHⅠ和HindⅢ
（4）2   2    基因突變
（5）ABD

點評 本題結合圖表，考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的操作工具、操作步驟及相關細節；識記植物組織培養的過程及條件，能正確分析題圖，再結合所學的知識準確答題．