Question

科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達．如圖表示構建重組質粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程．請據圖回答：

（1）步驟①和②中常用的工具酶有

 

．
（2）經過①和②步驟后，有些質粒上的

 

基因內插入了外源目的基因，形成重組質粒．
（3）步驟③是

 

的過程．
（4）步驟④：將三角瓶內的大腸桿菌接種到含四環素的培養基C上培養，目的是篩選

 

．能在C中生長的大腸桿菌有

 

種．
（5）步驟⑤：用無菌牙簽挑取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環素）和E（含四環素）兩個培養基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示．含目的基因的菌落位于（選填“D”或“E”）

 

上，請在圖中相應的位置上圈出來．

Answer 1

考點：基因工程的應用,微生物的分離和培養

專題：

分析：步驟①是將環狀質粒切割開，步驟②是將目的基因與質粒連接，步驟③是將目的基因導入受體細胞，④是對大腸桿菌進行培養和篩選，⑤是用選擇培養基進一步篩選菌落．

解答： 解：（1）將質粒切割開用限制酶，將目的基因與質粒連接起來用DNA連接酶．
（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中．
（3）步驟③是基因工程第三步：將目的基因導入受體細胞．
（4）培養基C是選擇培養基，培養基中有四環素，專一篩選含四環素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有兩種，分別是抗四環素和同時抗四環素和含氨芐青霉素的大腸桿菌．
（5）D培養基中大腸桿菌對四環素和含氨芐青霉素都抗，而E中只抗一種四環素，所以在E中對應區域（D中沒有菌落的部位），該處為轉基因大腸桿菌．
答案：
（1）限制性內切酶、DNA連接酶
（2）氨芐青霉素抗性 
（3）將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞） 
（4）含四環素抗性基因的大腸桿菌      2  
 （5）E

點評：本題考查轉基因大腸桿菌培養和篩選過程，解題的關鍵是理解選擇培養基的使用和篩選過程．