Question

12．人類有許多疾病是由細菌或病毒導致的．因此水在飲用前的檢驗是有效監控疾病發生的必要措施，請回答下列有關問題：
（1）檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，記錄菌落數量，這種方法稱為稀釋涂布平板法，所用的培養基需要滅菌，其常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌．
（2）用該方法統計樣本菌落數時是否需要設置對照組？需要設置（對照組）為什么？因為需要判定培養基是否被雜菌污染（培養基滅菌是否合格）．
（3）如分別取0.1mL已稀釋10³倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養基的表面進行培養，培養基記錄到大腸桿菌的菌落數分別為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數為5.6×10⁸個．
（4）已知大腸桿菌能發酵乳糖并產酸產氣，現提供足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培養液和具塞試管，應如何判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養24h．試管內有氣泡生成的說明水樣中有大腸桿菌．
（5）某致病病毒的遺傳物質是DNA，但是病毒DNA極少，這時可以通過PCR技術擴增病毒DNA片段，然后進行檢測．采用這種技術進行DNA擴增時，一定需要用到的酶是耐高溫的DNA聚合酶．

Answer 1

分析 1、稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基上，進行培養，在稀釋度足夠高的菌液離，聚集在一起的微生物被分散成單個細胞，從而獲得由單細胞繁殖而來的菌落．
2、對微生物進行分離、計數常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數=（平板的平均菌落數÷涂布的體積）×稀釋的倍數．

解答 解：（1）由題意知，檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，記錄菌落數量，這種接種方法是稀釋涂布平板法．
（2）用稀釋涂布平板法統計樣本菌落數時需要設置對照組，因為因為需要判斷培養基是否被雜菌污染（培養基滅菌是否合格）．
（3）每升原水樣中大腸桿菌數為：（55+56+57）÷3×10000×10³=5.6×10⁸個
（4）檢測水樣中是否含有大腸桿菌的方法是：通過無菌操作向試管內注入一定量待測水樣．再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養24h．若試管內有氣泡生成，則說明水樣中有大腸桿菌．
（5）擴增DNA一般運用PCR技術，由于PCR技術中運用高溫解鏈，因此利用的DNA聚合酶是耐高溫的DNA聚合酶．
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法　高壓蒸汽滅菌
（2）需要設置（對照組）　 因為需要判定培養基是否被雜菌污染（培養基滅菌是否合格）
（3）5.6×10⁸個
（4）通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養24 h．試管內有氣泡生成的說明水樣中有大腸桿菌
（5）PCR　 耐高溫的DNA聚合酶

點評 本題主要考查微生物實驗室分離、PCR技術等相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確的判斷．