Question

1．下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程，請回答：

（1）埃博拉病毒（EBO）的遺傳物質是RNA，EBO病毒容易變異的原因是RNA是單鏈結構，突變率較高，穩定性較差．
（2）科研人員利用經EBO免疫后小鼠的B淋巴細胞與鼠的瘤細胞進行雜交，獲得純凈的單一品種抗體，其特點是特異性強、靈敏度高、反應快（產量大），可以用此抗體與放射性同位素、化學藥物或細胞毒素相結合，制成“生物導彈”，抗擊埃博拉病毒（EBO）．選擇培養基上存活的雜交瘤細胞產生的抗體不是（是、不是）單克隆抗體．
（3）過程①中選用EcoRI和XhoI兩種限制酶切割的優點是防止目的基因（質粒）的自身環化．
（4）過程②中首先需要用Ca²⁺處理大腸桿菌，使其處于感受態，VP40基因進入大腸桿菌后維持穩定并表達的過程稱為轉化．
（5）圖示過程應用的生物技術有基因工程、動物細胞融合、動物細胞培養（至少答出三種）．

Answer 1

分析 1、圖示過程中，①為獲取目的基因，形成重組質粒，②為目的基因導入導入大腸桿菌，③為獲取相應的蛋白質，④為形成雜交瘤細胞．
PCR技術的過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取 ②利用PCR技術擴增 ③人工合成（化學合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
3、DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
4、動物細胞融合原理是：細胞增殖、細胞膜的流動性．
細胞融合的方法有：物理法：離心、振動、電激；化學法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺病毒）．
最廣泛的應用是：制備單克隆抗體．一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產量低、純度低、特異性差．

解答 解：（1）埃博拉病毒（EBO）的遺傳物質是RNA，而RNA是單鏈結構，突變率較高，穩定性較差，所以EBO病毒容易變異．
（2）經EBO免疫后小鼠體內可獲取漿細胞，其與鼠的瘤細胞進行雜交，獲得純凈的單一品種抗體，即單克隆抗體，其特點是特異性強、靈敏度高、反應快（產量大），可以用此抗體與藥物制成“生物導彈”，抗擊埃博拉病毒（EBO）．選擇培養基上存活的雜交瘤細胞沒有經過擴大培養，其產生的抗體不是單克隆抗體．
（3）（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質粒自行環化，酶切時可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率．
（4）VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內維持穩定和表達，該過程可稱為轉化．
（5）圖示過程應用的生物技術有基因工程、動物細胞培養、動物細胞融合等．
故答案為：
（1）RNA是單鏈結構，突變率較高，穩定性較差
（2）經EBO免疫后      特異性強、靈敏度高、反應快（產量大）（答出兩點即給分）   生物導彈  不是
（3）防止目的基因（質粒）的自身環化    
（4）轉化
（5）基因工程、動物細胞融合、動物細胞培養

點評 本題綜合性較強，考查了基因工程、單克隆抗體的制備等知識，要求考生具有扎實的基礎知識，并構建一定的知識網絡．