Question

8．下面是從土壤中分離與計數自生固氮菌的實驗，完成下列問題：
實驗原理：農田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多．將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無氮培養基上進行培養．在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖．
材料用具：農田的表層土壤、無氮培養基、牛肉膏蛋白胨培養基、盛有9mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養皿、盛有90mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱．
（1）方法步驟：
①倒平板：分別將無氮培養基、牛肉膏蛋白胨培養基倒平板，應在酒精燈火焰旁操作．
②制備土壤稀釋液
③涂布：按照由10⁷～10³稀釋度的順序分別吸取0.1mL進行平板涂布，每個稀釋度下，無氮培養基應至少涂布3個平板，牛肉膏蛋白胨培養基涂布1個．
④培養：放入恒溫箱內，在28℃～30℃下培養3d～4d．
⑤細菌的計數：當菌落數目穩定時，選取菌落數在30～300的平板進行計數．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌株數是5×10⁷．（稀釋度是10⁵）
（2）預期結果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養基上的菌落數多于（選填“多于”或“少于”）無氮培養基上的數目．原因是無氮培養基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養基上大多數菌類都能生長．

Answer 1

分析 微生物培養的關鍵是無菌操作，是由的接種過程都應該在酒精燈火焰旁進行．為避免實驗誤差，保證結果準確，一般設置3～5個平板，選擇菌落數在30～300的平板進行計數，并取平均值．

解答 解：（1）①在酒精燈火焰旁倒平板，可以減少雜菌污染．
③為了避免實驗誤差，保證結果準確，一般設置3～5個平板，空白對照組需要牛肉膏蛋白胨培養基涂布1個．
⑤選擇菌落數在30～300的平板進行計數，并取平均值．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌落數為（50÷0.1）×10⁵=5×10⁷．
（2）肉膏蛋白胨培養基作為對照，以消除無關變量對實驗結果的影響，該培養基適合其他細菌生存，所以，它比無氮培養基上的菌落數目多．
故答案為：
（1）酒精燈火焰    3   1   30～300   5×10⁷
（2）多于    無氮培養基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養基上大多數菌類都能生長

點評 本題通過探究實驗的過程考查微生物的培養、分離和計數等知識點．