Question

8．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，研究者將獲取的人htPA基因與質粒重組后導入到羊的受精卵中，再通過一系列早期胚胎培養和胚胎移植技術獲得轉htPA基因母羊，該轉基因羊的羊乳中可獲得研究所需的藥用蛋白．請結合所學知識回答下列問題：
（1）以人的基因組DNA作模板，利用引物在體外復制htPA基因的技術被稱為PCR技術，用同種限制性核酸內切酶（或同種限制酶）切割htPA基因與載體后，用DNA連接酶連接，可以構建基因表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA中，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術．
（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素使其超數排卵．采集的精子需要經過獲能（處理），才具備受精能力．
（3）將重組表達載體導入受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得更多母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定（或胚胎檢查）．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，分割胚胎時要注意將內細胞團均等分割．
（4）若在轉ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
（5）這種通過分泌乳汁生產藥用蛋白的轉基因羊被稱為乳腺（或乳房）生物反應器．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植．

解答 解：（1）體外擴增基因常用PCR技術，htPA基因與載體需要用同種限制性核酸內切酶（或同種限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通過DNA連接酶連接，以構建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術．
（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數排卵．采集的精子需要經過獲能（處理），才具備受精能力．
（3）將重組表達載體導入受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定，以選擇母羊的胚胎進行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現了早期胚胎細胞的全能性，分割胚胎時要注意將內細胞團均等分割．
（4）若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
（5）這種通過分泌乳汁生產藥用蛋白的轉基因羊被稱為乳腺（或乳房）生物反應器．
故答案為：
（1）PCR  同種限制性核酸內切酶（或同種限制酶）    DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）促性腺激素    獲能（處理）
（3）顯微注射法    性別鑒定（或胚胎檢查）    內細胞團
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）
（5）乳腺（或乳房）生物反應器

點評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進行胚胎移植；識記細胞全能性的概念等．要求考生具有扎實的基礎知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．