Question

8．利用微生物轉化膽固醇在醫藥生產上有重要作用．實驗人員從土壤中篩選膽固醇轉化菌株的過程如圖．請分析回答下列問題：

（1）實驗人員將土壤樣品接種到富集培養液①中培養時，需要將其置于搖床上不斷振蕩，其主要的作用有增加溶解氧
（2）培養一段時間后，從①中取適量培養液轉移接種到選擇培養液②中培養36h后，再轉移到相同的選擇培養液③中培養．與培養液①不同，培養液②③成份的主要特點是以膽固醇為唯一碳源．在相同的培養液②③中轉移培養主要是為了避免原培養液中的干擾，同時，又可以篩選純化獲得可轉化膽固醇的菌種
（3）從③中取適量的培養液涂布到④之前，需要，涂布前需將涂布器灼燒并冷卻
（4）根據⑤中菌落的形態特征，選取所需的菌種接種到培養基⑥中臨時斜面保藏．
（5）為進一步鑒定菌種，需從菌株中提取少量的DNA分子通過PCR（填技術）擴增并檢測．

Answer 1

分析 從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株．膽固醇屬于脂質，其主要元素組成為C、H、O．從土壤中篩選膽固醇轉化菌株需要使用以膽固醇為唯一碳源的選擇培養基．

解答 解：（1）分解膽固醇的微生物屬于需氧型微生物，所以將土壤樣品接種到富集培養液①中培養時，需要將其置于搖床上不斷振蕩以增加溶解氧．
（2）據圖分析，培養液②③的作用是選擇培養，篩選膽固醇轉化菌株需要使用以膽固醇為唯一碳源的選擇培養基．在相同的培養液②③中轉移培養主要是為了避免原培養液中碳源的干擾，又可以篩選純化獲得可轉化膽固醇的菌種．
（3）選擇培養后的培養液需要進行梯度稀釋才能進行涂布培養，涂布前需將涂布器在酒精燈火焰旁進行灼燒滅菌并冷卻．
（4）篩選出目的菌株后，將菌種接種到培養基⑥中臨時斜面保藏．
（5）為進一步鑒定菌種，需從菌株中提取少量的DNA分子通過PCR擴增并檢測．
故答案為：
（1）增加溶解氧
（2）以膽固醇為唯一碳源   碳源   篩選純化獲得可轉化膽固醇的菌種
（3）梯度稀釋   灼燒并冷卻
（4）斜面
（5）PCR

點評 本題主要考查微生物的篩選與分離、培養與保藏及PCR技術，意在強化學生對相關知識的識記、理解與運用．