Question

圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由＿＿＿＿＿＿連接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是＿＿＿＿＿末端，其產物長度為＿＿＿＿＿。
（3）若圖1中虛線方框內的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產物中共有＿＿＿＿＿種不同DNA片段。
（4）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是＿＿＿＿＿。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培養基進行培養。經檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

Answer 1

（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖　　（2）平　　537bp、790bp、661bp
（3）4　　（4）BamH I 抗生素B　　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接

解析