Question

（12分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是       末端，其產物長度為                                           。

（2）若圖1中虛線方框內的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產物中共有       種不同DNA片段。

（3）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是         。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加                 的培養基進行培養。經檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是                           

                                                            。

 

Answer 1

【答案】

（每空2分，共12分）（1）平    537bp、790bp、661bp （2）4 （3）BamH I    抗生素B    同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接

【解析】

試題分析：(1)由題意可知SamI是從中軸線處切開，產生的平末端，產生的片段，左邊534+3=537bp,中間796-6=790bp，右邊658+3=661bbp三個片段。

（2）由圖可知目的基因D有2個酶切位點，雜合子D可以切成3種不同長度的，突變后的d只有1個酶切位點可以切成2種不同長度的，其中有1種是和D相同，故共產生4種不同長度的片段。

（3）由圖可知目的基因要完全切割下來可以用BamHI酶，用MboI酶也可以，同樣質粒上也都有該酶切位點，但用MboI酶切后會將質粒上的2個抗性基因都破壞掉無法進行篩選，用BamHI酶切后質粒的抗生素A基因被破壞，故只能用含抗生素B的培養基鑒定。目的基因連進入但不能正確表達最可能的原因是因為同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接。

考點：本題考查基因工程相關知識，意在考察考生對知識點的理解掌握程度。