Question

1．如圖是制備抗埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白單克隆抗體的過程．請據圖回答：

（1）利用PCR獲取目的基因的過程中，反應體系內要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根據目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反應需要在一定的緩沖溶液中才能進行．
（2）選用EcoRI和XhoI雙酶切的優點是防止酶切產物之間的隨意連接，提高連接成功率；VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內維持穩定和表達，該過程可稱為轉化．
（3）過程⑥常用的不同于植物原生質體融合的促融方法是用滅活的病毒處理．若把在HAT選擇培養基上存活的細胞全部培養在同一培養基中，并從中提取出的抗體不是（是或不是）單克隆抗體．圖示過程應用的生物技術是基因工程、動物細胞培養、動物細胞融合．

Answer 1

分析 1、圖示過程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質粒，③為目的基因的導入，④為獲取相應的蛋白質，⑤為注射入B淋巴細胞，⑥為形成雜交瘤細胞，⑦為獲取單克隆抗體．
PCR技術的過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取  ②利用PCR技術擴增  ③人工合成（化學合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
3、DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
4、動物細胞融合原理是：細胞增殖、細胞膜的流動性．
細胞融合的方法有：物理法：離心、振動、電激；化學法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺病毒）．
最廣泛的應用是：制備單克隆抗體．一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產量低、純度低、特異性差．

解答 解：（1）PCR擴增時，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．故利用PCR獲取目的基因的過程中，反應體系內要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根據目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反應需要在一定的緩沖溶液中才能進行．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質粒自行環化，酶切時可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內維持穩定和表達，該過程可稱為轉化．
（3）誘導植原生質體能融合的方法：物理法：離心、振動、電激．化學法：聚乙二醇（PEG）．誘導動物細胞融合的方法有電激、聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒等；過程⑥常用的不同于植物原生質體融合的促融方法是用滅活的病毒處理．若把在HAT選擇培養基上存活的細胞全部培養在同一培養基中，并從中提取出的抗體不是單克隆抗體．圖示過程應用的生物技術是基因工程、動物細胞培養、動物細胞融合．

故答案為：
（1）目的基因的核苷酸序列 緩沖
（2）防止酶切產物之間的隨意連接，提高連接成功率  轉化 
（3）滅活的病毒  不是  基因工程、動物細胞培養、動物細胞融

點評 本題難度不大，綜合性較強，考查了基因工程、單克隆抗體的制備等知識，要求考生具有扎實的基礎知識，并構建一定的知識網絡．