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細胞工程是指應用________和________的原理和方法，通過某種工程學手段，在________和________水平上，按照人們的意愿，來改變細胞的________或獲得新產(chǎn)品的一門綜合科學技術。

回答下列有關基因工程和克隆技術的問題。（10分）

2006年12月22日，我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬在東北農(nóng)業(yè)大學的種豬場自然分娩產(chǎn)出，這標志著我國在轉基因克隆豬技術領域已達到世界領先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：

63、說出綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中用到了哪些生物工程技術？           　

利用了哪些原理？                      （本題答案從下列所給選項中選擇填寫）

①轉基因技術；②細胞核移植技術；③胚胎移植技術；④干細胞技術；⑤動物細胞培養(yǎng)技術

⑥基因突變；⑦基因重組；⑧動物細胞核具有全能性；⑨動物細胞具有全能性

64、過程①②中必需用到的酶分別是                和                 。綠色熒光蛋白基因之所以能與質粒重組，原因是                                               。

65、早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及               等物質。

通過上圖中過程①的方法獲取目的基因的數(shù)量是有限的，要獲得大量的綠色熒光蛋白基因可以利用PCR技術。PCR擴增反應（如下圖所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸點的條件下，發(fā)揮延伸DNA子鏈的作用，將單個脫氧核苷酸連續(xù)結合到雙鏈DNA片段的引物鏈上。請回答：

 

PCR（DNA聚合酶鏈式反應）技術示意圖：

	PCR（DNA聚合酶鏈式反應）技術示意圖

 

66、你認為TaqDNA聚合酶一定是從下列哪種生物體細胞中分離提取的？        

A．水母細胞         B．豬胎兒成纖維細胞   　C．極端嗜熱菌     D．大腸桿菌

67、下面的表達式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，為什么？                           。

 

68、用限制酶EcoRV、MboI單獨或聯(lián)合切割同一種質粒，得到DNA片段長度如下圖（1kb即1000個堿基對），請在答題卡的指定位置畫出質粒上EcoRV、MboI的切割位點和標出堿基對數(shù)。（2分）

（13分）干擾素是能夠抑制多種病毒復制的抗病毒物質。科學家利用基因工程技術從人的T淋巴細胞中提取干擾素基因轉入牛的基因組中，培育出的奶牛在乳汁中含有人體干擾素。下圖1是利用多種生物工程技術獲得轉基因牛的基本操作流程，圖2是圖1中A階段部分過程。請分析回答：

（1）利用基因工程可以獲得轉基因牛，從而改良奶牛的某些性狀。基因工程的四個基本操作步驟是                    、基因表達載體的構建、                    和                   。若要獲得的轉基因牛分泌的乳汁中含有人干擾素，則所構建的基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、           、＿＿＿＿  、＿＿＿＿  和復制原點等。將該基因表達載體導入受體細胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉化法），為獲得能大量產(chǎn)生人干擾素的轉基因牛，該基因表達載體應導入的受體細胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺細胞）。

 (2) B操作指               。A應保證發(fā)育到                 階段，才能進行B操作。

(3)為同時獲得多個完全相同的子代個體，可在進行B操作之前進行________________。

(4)除了按上述培育轉基因牛的方法來生產(chǎn)干擾素外，人們還提出了通過分離效應T細胞并進行體外培養(yǎng)讓其大量增殖，來生產(chǎn)大量干擾素的設想。請你運用細胞工程的原理，提出一個簡單而可行的設計思路：                                          。(2分)