Question

（七）回答下列有關基因工程和酶工程的有關問題
如圖所示為利用現代生物技術獲得能表達某蛋白酶工程菌的過程．選用質粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四種限制酶切割位點．請回答：

（1）構建含目的基因的重組質粒A時，應選用限制酶

 

，對

 

進行切割．再用

 

進行重組．
（2）圖中質粒同時用PstⅠ和ApaⅠ酶切，產生1800對堿基和8200對堿基的兩種片段，如用以上四種酶同時切割此質粒，則產生600對堿基和8200對的堿基兩種片段，那么用同時用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，則產生的片段有

 

．
（3）篩選后所得到的工程菌增值后表達出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不會分泌到細胞外，因此還需要利用酶工程中的

 

技術獲得此蛋白酶，
（4）獲得此蛋白酶后，利用酶的固定化技術能回收和重復利用此蛋白酶，以下屬于固定化技術中的載體結合法的是

 

Answer 1

考點：基因工程的應用

專題：

分析：抓住限制酶的特異性以及表達載體組成成分．蛋白酶是蛋白質不會分泌到細胞外，要想獲得此蛋白酶，只有破碎細胞，并分離提純．為了能被反復使用和與反應物分離，可以固定化酶．可以用物理的或化學的方法固定化．

解答： （1）目的基因上PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ切割位點，質粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ切割位點．切割質粒和含目的基因的DNA需要同種限制酶．但是目的基因上也有SmaⅠ切割位點，所以選用PstI、EcoRI 切割質粒和含目的基因的DNA．構建表達載體需要DNA連接酶．    故答案為：PstI、EcoRI     質粒和含目的基因的DNA     DNA連接酶
（2）質粒同時用PstⅠ和ApaⅠ酶切，產生1800對堿基和8200對堿基的兩種片段，說明質粒上含有10000個堿基對．用以上四種酶同時切割此質粒，則產生600對堿基和8200對的堿基兩種片段，則說明PstⅠ和SmaⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ切割位點間的都含有600對堿基．那么用同時用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，則產生的片段有600+600=1200對堿基（PstⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ之間的堿基）和600+8200=8800對堿基（EcoRⅠ、ApaⅠ和PstⅠ之間的堿基）．    故答案為1200對堿基、8800對堿基（3）工程菌增值后表達出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不會分泌到細胞外，要想獲得此蛋白酶，可以利用血紅蛋白的提取和鑒定方法進行破碎細胞并分離提純獲得．    故答案為：分離提純（4）酶本身還是溶于水的，用物理的或化學的方法使酶與水不溶性大分子載體結合或把酶包埋在其中．化學法包括結合法、交聯法．吸附法和共價鍵法又可統稱為載體結合法．A、B是包埋法，C是吸附法，D是交聯法．故選C

點評：意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系；理論聯系實際，綜合運用所學知識解決自然界和社會生活中的一些生物學問題的能力和從題目所給的圖形中獲取有效信息的能力．