Question

10．如圖是利用大腸桿菌生產埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的過程．請據圖回答：

（1）①利用PCR技術擴增目的基因的過程中，反應體系內要加入含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq酶，PCR的全稱是聚合酶鏈式反應，第3次復制的產物中才開始出現目的基因．
（2）過程②構建基因表達載體時選用EcoRI和XhoI雙酶切的優點是防止酶切產物之間的隨意連接，提高連接成功率，目的基因與質粒連接形成重組DNA后含有0個游離的磷酸基團．
（3）基因表達載體A的組成除了目的基因外，還必須有標記基因、啟動子、終止子，過程③VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內維持穩定和表達，該過程可稱為轉化．
（4）檢測過程④是否成功表達，通常從分子水平進行檢測的方法是抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 1、圖示過程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質粒，③為目的基因的導入，④為獲取相應的蛋白質．
2、PCR技術的過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）．

解答 解：（1）PCR擴增時，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全稱是聚合酶鏈式反應，由于引物A和引物B均不在該片段的端點，因此第一輪循環后，得到的兩DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長；通過繪圖可推知，第二輪中亦不會出現等長的引物，所以在第三輪循環產物中開始出現兩條核苷酸鏈等長的DNA片段．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質粒自行環化，酶切時可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；目的基因與質粒連接形成重組DNA后，形成的是環狀DNA，因此含有0個游離的磷酸基團．
（3）基因表達載體A的組成除了目的基因外，還必須有標記基因、啟動子、終止子；VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內維持穩定和表達，該過程可稱為轉化．
（4）檢測過程④是否成功表達，通常從分子水平進行檢測的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶     聚合酶鏈式反應     3
（2）防止酶切產物之間的隨意連接，提高連接成功率     0
（3）標記基因、啟動子、終止子    轉化
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題難度不大，綜合性較強，考查了基因工程、PCR等知識，要求考生具有扎實的基礎知識，并構建一定的知識網絡．