日本的下村修、美國的沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白(GFP)等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。GFP會發出綠色熒光，該蛋白質在生物工程中有著廣闊的應用前景。請據圖回答相關問題：
(1)圖中形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。如果限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有一個酶Ⅱ的切點。在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質粒和目的基因連接起來？理由是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)在②過程進行轉基因體細胞的篩選時，比較簡易的篩選方法是通過設備檢測，發出綠色熒光的細胞即為轉基因體細胞。綠色熒光蛋白在轉基因體細胞的________中合成，寫出這一過程包含的信息傳遞圖解：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)在③過程培養重組細胞時，培養液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和________等。
(4)在核移植過程中，供體細胞一般選用傳代到________代以內的轉基因體細胞，原因是________________________________________________________________________。乙兔提供的細胞應是________________________________________________________________________。
(5)錢永健通過改變氨基酸排序，造出能吸收、發出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發光更久、更強烈。對熒光蛋白的改造屬于________工程。
科目：高中生物 來源：湖北省公安三中2011－2012學年高二3月考試生物試題 題型：071
日本的下村修、美國的沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。GFP會發出綠色熒光，該蛋白質在生物工程中有著廣闊的應用前景。請據圖回答相關問題：
（1）圖中形成重組質粒，需要限制性內切酶切取目的基因、切割質粒。如果限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是－G↓GATCC－，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是－↓GATC－。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有一個酶Ⅱ的切點。在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質粒和目的基因連接起來________理由是________。
（2）在②過程進行轉基因體細胞的篩選時，比較簡易的篩選方法是通過設備檢測，發出綠色熒光的細胞即為轉基因體細胞。綠色熒光蛋白在轉基因體細胞的________中合成，寫出這一過程包含的信息傳遞圖解：________。
（3）在③過程培養重組細胞時，培養液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和________等。
（4）在核移植過程中，供體細胞一般選用傳代到________代以內的轉基因體細胞，原因是________。乙兔提供的細胞應是________。
（5）錢永健通過改變氨基酸排序，造出能吸收、發出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發光更久、更強烈。對熒光蛋白的改造屬于________工程。
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科目：高中生物 來源：2011-2012學年廣東省連州市連州中學高二下學期期中考試生物試卷（帶解析） 題型：綜合題
日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白(GFP)等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白(GFP)轉基因克隆豬的培育過程示意圖。據圖回答：
(1)圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性核酸內切酶切取目的基因、切割質粒。限制性核酸內切酶I的識別序列和切點是—G↓GATCC—，請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是______________________________。
(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是(用數字表示)________________________。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)
④表達出藍色熒光蛋白
（5）若要在體外擴增綠色熒光蛋白基因可采用PCR技術。標準的PCR過程分為三個步驟，第一步是“變性”,這一步驟如果發生在細胞內，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育過程中應用到的生物技術有_________________________________________等。(至少答出三項)
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科目：高中生物 來源：2013屆廣東省連州市高二下學期期中考試生物試卷（解析版） 題型：綜合題
日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白(GFP)等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白(GFP)轉基因克隆豬的培育過程示意圖。據圖回答：
(1)圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性核酸內切酶切取目的基因、切割質粒。限制性核酸內切酶I的識別序列和切點是—G↓GATCC—，請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是______________________________。
(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是(用數字表示)________________________。
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)
④表達出藍色熒光蛋白
（5）若要在體外擴增綠色熒光蛋白基因可采用PCR技術。標準的PCR過程分為三個步驟，第一步是“變性”,這一步驟如果發生在細胞內，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育過程中應用到的生物技術有_________________________________________等。(至少答出三項)
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科目：高中生物 來源： 題型：
日本的下修村、美國的沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。GFP會發出綠色熒光，該蛋白質在生物工程中有廣闊的應用前景。請據下圖回答相關問題：
（1）①過程除了用“鳥槍法”直接提取外，還可以用 得到目的基因。③過程通常用的方法是 。
（2）將綠色熒光蛋白基因導入受體細胞需要運載體的幫助。選取質粒作為運載體的原因除了具有1至多個的限制酶切點、具有某些標記基因外，還因為 。
（3）經過④過程后，有的細胞可能導入了重組載體，簡單的鑒定方法是利用 就可以把它們篩選出來。
（4）GFP發出的熒光穩定，檢測方便而且對細胞也不會產生明顯毒害，因此在基因工程中可以作為 ，用以追蹤多種生物細胞的遷移和變化情況。
（5）在核移植過程中，供體細胞一般用傳到 代以內的轉基因體細胞作為受體細胞。
（6）在⑤過程培養重組細胞時，必須模擬細胞在體內生存的良好環境和物質代謝過程，為其提供必須韻營養物質、適宜的酸堿度、滲透壓、溫度、二氧化碳以及嚴格 條件。胚胎移植的最佳時期是 。
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