Question

日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白(GFP)等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白(GFP)轉基因克隆豬的培育過程示意圖。據圖回答：

 (1)圖中通過過程①、②形成重組質粒，需要限制性核酸內切酶切取目的基因、切割質粒。限制性核酸內切酶I的識別序列和切點是—G^↓GATCC—，請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________­­______________。

(2)過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是________________________________。

(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是______________________________。

(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是(用數字表示)________________________。

①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列

③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)

④表達出藍色熒光蛋白

（5）若要在體外擴增綠色熒光蛋白基因可采用PCR技術。標準的PCR過程分為三個步驟，第一步是“變性”,這一步驟如果發生在細胞內，是在                     的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到                       酶。

 (6)以上培育過程中應用到的生物技術有_________________________________________等。(至少答出三項)   

 

Answer 1

【答案】

（1）

 

(2)顯微注射技術　(3)為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因　(4)②①③④　

(5)解旋酶   Taq(耐高溫的DNA聚合酶)　

(6)轉基因技術、核移植技術、動物細胞培養技術、胚胎移植技術(至少答出三項)

【解析】（1）黏性末端是雙鏈結構。

（2）將重組質粒導入動物細胞的方法是顯微注射法。

（3）標記基因是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因。

（4）蛋白質工程的操作順序是②①③④。

（5）細胞中將DNA雙鏈解開選擇解旋酶，DNA子鏈合成應選擇Taq酶。

（6）轉基因克隆動物應用到的技術手段有轉基因技術、核移植技術、動物細胞培養技術、胚胎移植技術等。