Question

19．某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出能高效降解脂肪的菌株．請回答：
（1）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以豆油為唯一碳源的固體培養基上，從功能上講，該培養基屬于選擇培養基．
（2）為避免培養皿污染，需將培養皿呈倒置狀態放置．為避免培養液中菌體濃度過高，需將培養液進行梯度稀釋處理．為了排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，需設置接種等量無菌水的培養基作為空白對照．
（3）為了篩選出菌株，可將適量的蘇丹Ⅳ試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現象是出現透明圈不出現紅色圈，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶．
（4）純化菌種時，為了得到單菌落，可采用平板劃線法接種于新的培養基平板上．
（5）試驗操作應在酒精燈火焰附近進行的原因是避免周圍環境中微生物的污染．

Answer 1

分析 （1）培養基的營養構成：各種培養基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽．培養基的分類：①按物理性質分，分為液體培養基和固體培養基，固體培養基中含有凝固劑，一般是瓊脂．②按化學成分分，分為天然培養基和合成培養．兩者的區別是天然培養基成分不確定，合成培養基成分的含量是確定的．③按用途分，分為選擇培養基和鑒別培養基．選擇培養基主要是培養、分離特定的微生物，培養酵母菌可在培養基中加入青霉素；鑒別培養基可以鑒定不同的微生物，比如鑒別飲用水中是否含有大腸桿菌，可以用伊紅-美藍培養基，如果菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，說明有大腸桿菌．
（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法．
培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法．
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養基表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體--菌落．

解答 解：（1）欲篩選出能降解豆油的菌株，培養基中應只含有豆油而無其它碳源，不能降解豆油的細菌在此培養基上不能生存，從功能上講，這類培養基屬于選擇培養基．
（2）為避免培養皿污染，需將培養皿呈倒置狀態放置．為避免培養液中菌體濃度過高，需將培養液進行梯度稀釋處理．為了排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，需設置接種等量無菌水的培養基作為空白對照．
（3）由于脂肪遇蘇丹Ⅳ試劑會出現紅色，所以為了篩選出菌株，可將適量的蘇丹Ⅳ試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現象是出現透明圈、不出現紅色圈，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶．
（4）分離純化菌種時，需采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，使聚集在一起的細菌細胞分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落，以便純化菌種．
（5）試驗操作應在酒精燈火焰附近進行，從而避免周圍環境中微生物的污染．
故答案為：
（1）豆油     選擇
（2）倒置       梯度稀釋     實驗組中非測試因素對實驗結果的影響（培養基被污染）
（3）蘇丹Ⅳ出現透明圈、不出現紅色圈
（4）平板劃線
（5）避免周圍環境中微生物的污染

點評 本題的知識點是微生物培養過程中的無菌技術，分離微生物的常用的接種方法和接種工具，主要考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系的能力．關鍵是運用所學過的知識點“透明圈”，進行知識點的遷移、類比，然后解決問題．