Question

6．煙草花葉病毒（TMV）是一種在煙草及蔬菜等經濟作物中廣泛傳播的病毒，對農業生產造成很大的危害．研究者利用植物基因工程的方法將煙草花葉病毒外殼蛋白基因（CP基因）導入煙草并在轉化的煙草植株中表達，使其獲得對煙草花葉病毒的抗性．如圖是轉化煙草植株的培育流程，請回答：
（1）含有CP基因的cDNA文庫是通過將TMV的RNA進行反轉錄獲得的．在對cDNA進行PCR擴增時，設計的引物自身不能含有互補序列．
（2）將CP基因導入土壤農桿菌質粒的T-DNA區，其原因是T-DNA可以從農桿菌中轉移并穩定整合到植物染色體的DNA中．
（3）在配置誘導芽、根的培養基時，要注意在不同的培養階段需調整生長素和細胞分裂素的比例．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）以RNA為模板合成DNA的過程為逆轉錄過程，故含有CP基因的cDNA文庫是通過將TMV的RNA進行反轉錄獲得的．在對cDNA進行PCR擴增時，設計的引物自身不能含有互補序列，否則兩引物會互補配對形成雙鏈．
（2）由于土壤農桿菌T-DNA可以從農桿菌中轉移并穩定整合到植物染色體的DNA中，故將目的基因CP基因導入土壤農桿菌質粒的T-DNA區．
（3）生長素與細胞分裂素比值較高時有利于生根，較低時有利于生芽，在配置誘導芽、根的培養基時，要注意在不同的培養階段需調整生長素和細胞分裂素的比例．
故答案為：
（1）反轉錄    互補
（2）T-DNA區    T-DNA可以從農桿菌中轉移并穩定整合到植物染色體的DNA中
（3）生長素和細胞分裂素

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．