Question

如圖是將人的生長激素基因導入細菌細胞B制造工程菌的示意圖．已知細菌細胞B不含質粒A，也不含質粒A上的基因．質粒A導入細菌細胞B后，其上的基因能得到表達．請回答下列問題
（1）目的基因可通過PCR技術獲取，這一技術中需要的酶是

 

．
（2）將目的基因與質粒結合形成重組質粒的過程中，需要的工具酶有

 

．
（3）若要檢測目的基因是否導入，可在培養細菌B的培養基中加入

 

（氨卞青霉素/四環素），若在培養基上觀察到大量的細菌B的菌落，表明目的基因已成功導入細菌B，此時所用的培養基屬于

 

培養基（按功能分）．
（4）若要比較準確地了解轉化率，一般可通過統計菌落的數目來推測活菌數目，還可以通過

 

方法統計統計活菌數目；前者統計的活菌數目比實際的數目

 

（多；少；一樣），原因是

 

．為了保證統計數目的準確，還應該設計

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：1、PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術．在模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）為條件下在體外進行DNA復制．具體過程有：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．
2、若細菌植入到含有四環素的培養基中，如果能生存，說明該菌具有含抗四環素基因的質粒A，如果不能生存，說明該菌沒有抗四環素基因質粒A．若細菌植入到含有氨芐青霉素的培養基中，如果能生存，說明該菌具有含抗氨芐青霉素基因的質粒A，如果不能生存，說明該菌沒有抗氨芐青霉素基因的質粒A．

解答： 解：（1）PCR擴增技術是在模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物存在下，依賴于熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）促合成反應．
（2）將目的基因與質粒結合形成重組質粒的過程中，需要同一種限制酶切割目的基因和質粒，使他們露出相同的末端，在用DNA連接酶連接形成重組質粒．
（3）通過抗性基因可以檢測目的基因是否導入．據圖可知，重組質粒時抗氨芐青霉素基因被破壞，而抗四環素基因沒有被破壞．因此可在培養細菌B的培養基中加入四環素，若在培養基上觀察到大量的細菌B的菌落，表明目的基因已成功導入細菌B．所用的培養基屬于篩選用的．
（4）通過顯微鏡直接統計菌落的數目，通過統計菌落的數目來推測活菌數目比實際的數目要少．當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只有一個菌落，不是很精確，所以要設計對照實驗來確定統計數目的準確．
故答案為：
（1）耐高溫的DNA聚合酶
（2）限制性核酸內切酶、DNA連接酶
（3）四環素    選擇
（4）顯微鏡直接計數　　少         當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落       對照組

點評：做本題時要區分DNA連接酶和DNA聚合酶的生理功能，要正確分析抗性基因的生理作用．