Question

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發現以來，一直作為一個監測完整細胞和組內基因表達及蛋白位的理想標記．請根據圖表回答下列問題．
（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶

 

，再對

 

進行切割．
（2）若對符合設計要求的重組質粒A進行酶切，假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據圖表中的信息分析，若采用BamH1和Pst1酶切，可得到

 

種DNA片段，限制性核酸內切酶所切割的化學鍵是

 

．
（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察GFP的表達，圖中綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的轉基因操作中的GFP既是

 

也是

 

．
（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到多項現代生物技術，圖中⑤⑥⑦過程屬于

 

技術．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：據圖分析，①表示獲取目的基因，②表示用限制酶切割質粒，③表示基因表達載體的構建，④表示將目的基因導入受體細胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細胞提取細胞核，⑥表示將豬卵母細胞去除細胞核，⑦表示核移植，⑧表示動物細胞培養，⑨表示胚胎移植．

解答： 解：（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點；則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質粒，再用DNA連接酶把目的基因和運載體相連．
（2）PstI可將重組質粒的N端切開，而BamHⅠ能在重組質粒的黑色部分切開，這樣就得到2種DNA．限制性核酸內切酶所切割的化學鍵是磷酸二酯鍵．
（3）據圖解，可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據此檢測GFP是否成功導入細胞，作為標記基因．
（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過程屬于核移植技術．
故答案為：
（1）HindIII和PstI  Ti質粒
（2）2   磷酸二酯鍵
（3）目的基因  標記基因
（4）核移植

點評：本題綜合考查了基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，屬于對識記、理解層次的考查．