Question

17．回答下列有關癌癥治療方法的問題．
（1）“生物導彈”治療：“生物導彈”是將抗癌細胞的單克隆抗體與化學藥物等結合并注入人體內，借助其導向作用，定向殺死癌細胞；它的制備所運用的生物技術主要有動物細胞培養、動物細胞融合．
（2）“原位免疫”治療設想：最新研究報道稱，一種常見的植物病毒外殼，注射到卵巢癌、結腸癌或乳腺腫瘤中，不僅能引發小鼠的免疫系統來消滅腫瘤，而且還提供了全身性保護來對抗腫瘤轉移．欲獲得大量這種植物病毒外殼，設計的基因工程流程如下圖．

（1）過程a是通過反轉錄法獲取目的基因，體外進行的b、c技術叫多聚酶鏈式反應（PCR）．
（2）過程d，e說代表的基因工程步驟是基因表達載休的構建．
（3）過程f中用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞．
（4）檢測目的基因在大腸桿菌中是否翻譯成病毒外殼的方法是抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的獲取
1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因．
2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法_和化學合成法_．
3、PCR技術擴增目的基因
（1）原理：DNA雙鏈復制
（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成．
第二步：基因表達載體的構建
1、目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用．
2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因
（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質．
（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端．
（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素基因．
第三步：將目的基因導入受體細胞
1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程．
2、常用的轉化方法：
將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是 農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和 花粉管通道法等．
將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是 顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵．
將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是 大腸桿菌，其轉化方法是：先用 Ca²⁺處理細胞，使其成為  感受態細胞，再將 重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程．
3、重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達．
第四步：目的基因的檢測和表達
1、首先要檢測 轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子雜交技術．
2、其次還要檢測 目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與 mRNA雜交．
3、最后檢測 目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取 蛋白質，用相應的 抗體進行抗原-抗體雜交．
4、有時還需進行 個體生物學水平的鑒定．如 轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀．

解答 解：（1）生物導彈：單克隆抗體+放射性同位素、化學藥物或細胞毒素（借助單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞．療效高，副作用小，位置準確．）它的制備所運用的生物技術主要有動物細胞培養和動物細胞融合．
（2）①過程a是通過反轉錄法獲取目的基因，體外進行的b、c技術叫多聚酶鏈式反應（PCR）．
②過程d，e說代表的基因工程步驟是基因表達載休的構建，用限制酶切割質粒和目的基因，再用DNA連接酶鏈接成重組質粒．
③如果受體細胞是微生物，則過程f中用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞．
④檢測目的基因在大腸桿菌中是否翻譯成病毒外殼的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）單克隆抗體   動物細胞培養   動物細胞融合（順序可顛倒）
（2）①反轉錄   多聚酶鏈式反應（PCR）
②基因表達載休的構建
③感受態④抗原-抗體雜交

點評 本題結合利用基因工程技術生產抗藥物的操作過程示意圖，考查基因工程、細胞分化等知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程或物質的名稱．