Question

【題目】飼養動物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質，很難被動物吸收利用，還影響對其他營養物質的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等。以下是科研人員從作物根部土壤中分離產植酸梅的菌株的過程示意圖。請分析作答。

（1）圖示培養基中除了添加 以外，應含有碳源、氮源、水、其他無機鹽等基本營養物質。

（2）接種以前要進行系列稀釋操作，目的是在固體培養基表面形成 。根據土壤樣品的稀釋倍數和接種稀釋液的體積，統計平板上的 就能大致推測出樣品中的活菌數。通常每種稀釋液需涂布三個平板，取其平均值。若將最后一個試管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培養后獲得平均值是48個菌落，則lg土壤中含有此菌的菌株數是 。

（3）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下到選項不需要的是 （填序號）。

①酒精 ②培養皿 ③顯微鏡 ④無菌水

（4）在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 。

（5）產植酸梅的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區域，根據透明區域，根據透明區域的有無，可初步判斷該菌是否產植酸酶。圖中降解圈大小與植酸酶的 有關。實驗結果顯示A-E五種菌株中， 是產值酸酶最理想的菌株。分離并獲得菌種后，若需長期保存，應使用 法。

Answer 1

【答案】（10分）（1）植酸鈣 （2）單個菌落 菌落數 4．8×107 （2分）

（3）③ （4）培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果（不易培養得到單個菌落）

（5）量與活性（全對給分） E 甘油管藏

【解析】

試題分析：（1）從作物根部土壤中分離產植酸酶的菌株需要使用含植酸鈣的選擇培養基,因此圖示培養基中除了添加植酸鈣以外，應含有碳源、氮源、水、其他無機鹽等基本營養物質。

（2）接種以前要進行系列稀釋操作，即采用稀釋平板法在固體培養基表面形成單個菌落，以達到純化菌種的。根據土壤樣品的稀釋倍數和接種稀釋液的體積，統計平板上的菌落數就能大致推測出樣品中的活菌數。若將最后一個試管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培養后獲得平均值是48個菌落，則lg土壤中含有此菌的菌株數是48×10×103×102＝4．8×107個。

（3）在系列稀釋操作中，需要用無菌水對樣品稀釋；涂布平板操作的程序為：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中→取少量菌液滴加到培養基表面→涂布前需將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s→用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。綜上所述，在樣品稀釋和涂布平板步驟中，不需要顯微鏡，即③。

（4）在涂布平板時，若滴加到培養基表面的菌懸液量過多，則會使培養基表面的菌懸液出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果，不易培養得到單個菌落，因此滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多。

（5）植酸鈣的不溶解性使培養基中形成白色渾濁，產植酸酶的菌株會水解植酸鈣，使菌落的周圍形成透明降解圈，降解圈大小與植酸酶的量與活性有關。實驗結果顯示：在A-E五種菌株中，E菌落周圍形成的透明降解圈最大，因此E菌株是產植酸酶最理想的菌株。若需長期保存分離并獲得菌種，應使用甘油管藏法。