Question

【題目】請回答下列內容：

（1）氨基酸序列分析技術和DNA序列分析的方法，為基因序列圖的繪制提供了可能。DNA合成儀的問世為___________、探針、小分子量DNA基因的獲得提供了方便。

（2）研究人員用大腸桿菌作生產菌，利用基因工程技術分別生產胰島素兩條鏈。由A、B兩條肽鏈可推導出A、B基因的堿基序列，依據是______________________。因為A、B基因中的脫氧核苷酸數量較少，常用___________方法獲取目的基因。

（3）目的基因擴增通常采用PCR技術，一個DNA在第三次擴增需引物對數為___________。

（4）檢測A、B基因是否導入受體細胞時，常用___________作探針。檢測胰島素基因是否表達常用___________雜交方法。

（5）引導肽是由引導肽基因控制合成的一段多肽序列，若在胰島素的A、B肽鏈的前端加上引導肽序列后，可將A、B肽鏈引導到大腸桿菌的細胞膜外，便于A、B肽鏈提取。為實現上述目的，操作是______________________。在以后的體外加工過程中，需要用___________切除引導肽。

Answer 1

【答案】引物??? 氨基酸和密碼子的對應關系和堿基互補配對原則??? 人工合成??? 4??? 放射性標記的A、B基因的一條單鏈??? 抗原—抗體??? 將A、B基因連接在引導肽基因后??? 肽酶???

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）DNA合成儀可以用于體外DNA分子小的片段的合成，因此為小分子量的DNA的合成、PCR擴增中引物的合成以及基因工程中基因探針的制作提供了方便。

（2）根據胰島素兩條鏈上的氨基酸序列，利用氨基酸與密碼子的對應關系可以推導出mRNA上的核苷酸序列，進而根據堿基互補配對的關系推導出合成胰島素A、B兩條肽鏈的A、B基因的堿基序列。因為A、B基因中的脫氧核苷酸數量較少，常用人工合成法合成目的基因。

（3）一個DNA復制兩次得到4個DNA分子，在第三次擴增時需引物對數為4對。

（4）檢測A、B基因是否導入受體細胞時，常用同位素標記的目的基因的單鏈作為探針（放射性標記的A、B基因的一條單鏈），與從受體細胞內取出的核DNA分子的單鏈進行雜交，觀察有無雜交帶的出現。檢測胰島素基因是否表達出胰島素時，常用抗原-抗體雜交法判斷。

（5）根據題意，在胰島素的A、B肽鏈的前端加上引導肽序列后，可將A、B肽鏈引導到大腸桿菌的細胞膜外，便于A、B肽鏈提取，為了達到這一目的可以將將A、B基因連接在引導肽基因后構建成基因表達載體，導入大腸桿菌細胞內。該胰島素分泌后還需要切除引導肽序列，因此根據酶的專一性，需要用肽酶切除引導肽。