Question

2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。下圖為我國首例綠色熒光蛋白(GFP)轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：

(1)圖中通過過程①②形成重組質粒，需要限制酶切取目的基因、切割質粒。限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。

①請畫出質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

______________________________________________________________________

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來________，理由是：__________________________________________________。

（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用的方法_____________。

(3)GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是__________________。

如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，獲得的轉基因克隆豬，可以解決的醫學難題是避免器官移植發生________反應。

(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：________(用數字表示)。

①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列

③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)

④表達出藍色熒光蛋白

Answer 1