Question

天然釀酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶類，用作發酵原料的淀粉需經一系列復雜的轉化過程才能被利用．研究者從某絲狀真菌中獲取淀粉酶基因并轉入釀酒酵母菌，獲得的釀酒酵母工程菌可直接利用淀粉產生酒精．請回答下列問題：

（1）將淀粉酶基因切割下來所用的工具是 ，用 將淀粉酶基因與載體拼接成新的DNA分子，此表達載體除目的基因外，必須含有 、 和標記基因．

（2）若要鑒定淀粉酶基因是否插入釀酒酵母菌，可采用的檢測方法 ，該項方法要用 作探針進行檢測；若要鑒定淀粉酶基因是否翻譯成淀粉酶，可采用 方法檢測．

（3）采用PCR技術可對目的基因進行體外擴增．該反應體系的主要成分應包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水、4種dNTP、模板DNA、引物和 ．其中引物有 種，實質是 ，假如引物都用3H標記，從理論上計算循環4次，所得DNA分子中含有3H標記的占 ．

（4）已知BarnHⅠ與BglⅡ的識別序列及切割位點如圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數個BarnHⅠ和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復的切割、連接操作，若干循環后 序列明顯增多．

Answer 1