Question

自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數量的測定。下面是對大腸桿菌進行數量測定的實驗，請回答有關問題。步驟如下：
A.制備稀釋倍數為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液。
B.為了得到更加準確的結果，你選用             (稀釋混合平板法、稀釋涂布平板法)接種樣品。
C.適宜溫度下培養。
結果分析：
（1）測定的大腸桿菌數，在對應稀釋倍數為10⁶的培養基中，得到以下幾種統計結果，正確可信的是(      )
A.一個平板，統計的菌落數是23
B.兩個平板，統計的菌落數是22和26，取平均值24
C.三個平板，統計的菌落數分別是21、5和52，取平均值26
D.四個平板，統計的菌落數分別是21、30、24和25，取平均值25
（2）一同學在稀釋倍數為10⁵的培養基中測得平板上菌落數的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌落數是(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2mL)_____________________。
（3）用這種方法測定密度，實際活菌數量要比測得的數量           （1分），因為________________                                                             。
（4）某同學在測定大腸桿菌的密度時發現，在培養基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？        （1分），為什么？                             。

Answer 1

步驟B：稀釋混合平板法    結果分析：（1）D   （2）1.17×10⁸（3）多 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落（4）不能 因為不能排除雜菌來自培養基或來自培養過程 

解析試題分析：平板劃線分離法是指由接種環以無菌操作蘸取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，經培養后，可在平板表面得到單菌落。稀釋倒平板法又分為稀釋涂布平板法和稀釋混合平板法。稀釋涂布平板法就是將稀釋后的菌液分別涂布在固體培養基的表面進行培養；稀釋混合平板法就是將不同濃度的稀釋液與已溶化并冷卻至45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾倒入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間后即可出現菌落。 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。由于大腸桿菌屬于兼性厭氧菌，為了得到更加準確的結果，最好選用稀釋混合平板法。統計菌落數計算的平板越多，其平均值越接近實際值。但是C選項中出現一個菌落數只有5的結果，不可信，因此答案選D。計算公式：每克樣品中的菌株數＝C/V×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表稀釋平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數。用這種方法測定密度，實際活菌數量要比測得的數量多，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。在培養基上還有其他雜菌的菌落，其原因可能有多種，一是大腸桿菌被污染了，二是培養基被污染了，三是培養過程中被污染了。
考點：本題考查微生物的培養和應用。
點評：本題意在考查考生的識記能力和應用能力，屬于中等難度題。