Question

9．用農桿菌轉化法可以獲取轉基因抗病植物，回答有關問題：
（1）若該抗病基因取自某種真菌的CDNA文庫，轉入植物細胞后，（能、否）能正常表達．若想短時間內得到大量的抗病基因，需用到PCR技術，中文全稱為多聚酶鏈式反應引物，條件除了原料、能量、模板外還需要Taq（或熱穩定DNA聚合）．
（2）某培養基中的卡那霉素會抑制愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養基篩選已導入抗病基因的植物細胞，應使構建的基因表達載體中含有抗卡那霉素基因，作為基因標記
（3）農桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染裸子植物和雙子葉植物，其原因是該類植物受到損傷時，傷口的細胞會分泌大量的酚類物質，吸引農桿菌移向這些細胞．
（4）Ti質粒的T-DNA（可轉移的DNA）可整合到植物細胞中染色體DNA上，所以，構建基因表達載體時，將目的基因插入到T-DNA序列中．用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．

Answer 1

分析 1、農桿菌轉化法的具體過程：
（1）利用土壤的Ti質粒構建基因表達載體，即將目的基因整合到土壤農桿菌的Ti質粒上．
（2）將整合了目的基因的Ti質粒導入土壤農桿菌細胞內．
（3）利用土壤農桿菌感染植物細胞，該過程實際上是將含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒導入植物細胞內．
（4）含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒進入植物細胞后，可以把自己的一段基因整合到細胞核中的染色體上，這段基因中包含了目的基因．
2、農桿菌轉化法的原理：農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．

解答 解：（1）cDNA文庫中的基因雖然沒有啟動子和終止子，但在構建基因表達載體時，已經具備了啟動子和終止子等結構，因此轉入植物細胞后，能正常表達．PCR技術可在短時間能得到大量的抗病基因；PCR技術的中文全稱為多聚酶鏈式反應引物，條件除了原料、能量、模板外還需要Taq（或熱穩定DNA聚合）．
（2）某培養基中的卡那霉素會抑制愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養基篩選已導入抗病基因的植物細胞，應使構建的基因表達載體中含有抗卡那霉素基因，作為基因標記．
（3）農桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染裸子植物和雙子葉植物，其原因是該類植物受到損傷時，傷口的細胞會分泌大量的酚類物質，吸引農桿菌移向這些細胞．
（4）Ti質粒的T-DNA（可轉移的DNA）可整合到植物細胞中染色體DNA上，所以，構建基因表達載體時，將目的基因插入到T-DNA序列中．構建基因表達載體時，首先需要用限制酶切割外源DNA和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．
故答案為：
（1）能   PCR   多聚酶鏈式反應引物   Taq（或熱穩定DNA聚合）
（2）抗卡那霉素      標記
（3）土壤    裸子植物      雙子葉       酚類物質
（4）染色體DNA   T-DNA序列        限制酶和DNA連接酶

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能結合所學的知識準確答題．