Question

由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖甲所示）．
（1）圖甲中，過程①需要的酶有

 

．為達到篩選目的，平板內的固體培養基應以

 

作為唯一碳源．②、③過程需要重復幾次，目的是

 

．
（2）某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經培養后的菌落分布如圖乙所示．該同學的接種方法是

 

；推測該同學接種時可能的操作失誤是

 

．
（3）以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發酵，接種

 

菌的發酵罐需要先排氣，其原因是

 

．
（4）若要對培養液中的酵母菌進行計數，下表是取0.1ml菌液進行涂布時，不同稀釋倍數下統計的平板培養基上的菌落數：

稀釋倍數		103	104	105
重復 實驗	1	1498	126	12
	2	1208	128	9
	3	1189	133	6

根據表中數據估算培養液中酵母菌的濃度約為

 

個/ml

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,微生物的分離和培養

專題：

分析：分析圖甲：圖甲是將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種的過程．圖中①表示基因表達載體的構建過程；②、③過程重復幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌．
分析圖乙：圖乙是一個平板經培養后的菌落分布，可見其采用的是稀釋涂布平板法，但圖中群落分布相對較集中．

解答： 解：（1）圖甲過程①表示基因表達載體的構建，該過程先要用同種限制性核酸內切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒，再用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來形成重組質粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養基可以選出工程酵母菌．②、③過程重復幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌．
（2）由圖乙可知，該同學采用的是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好的分散開來，可能是涂布不均勻導致的．
（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即將淀粉分解產生葡萄糖的能力強，導致酒精發酵速率快，產生二氧化碳的速率更快，所以接種工程酵母菌的發酵罐要先排氣．
（4）根據表中數據可知，稀釋倍數為10³和10⁵時，各組數據之間的誤差較大，而稀釋倍數為10⁴時，各組數據比較接近，同時用稀釋涂布平板法計數時，要選用菌落數在30-300間的平板培養基，因此可以根據稀釋倍數為10⁴時的數據估算培養液中酵母菌的濃度，即

126+128+133

3

×104×10=1.29×10⁷個/ml．
故答案為：
（1）限制性核酸內切酶、DNA連接酶    淀粉     進一步篩選純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌   
（2）稀釋涂布平板法    涂布不均勻  
（3）工程酵母     工程菌分解淀粉產生葡萄糖的能力強，導致酒精發酵產生CO₂的速率更快   
（4）1.29×10⁷

點評：本題以工程菌為素材，結合圖表綜合考查基因工程、微生物的實驗室培養、果酒制作、培養液中酵母菌數量的變化，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟；識記微生物的接種方法，能根據圖乙判斷接種方法及圖乙現象出現的原因；能分析表格，明確稀釋倍數為10³和10⁵時，各組數據之間的誤差較大，可通過稀釋倍數為10⁴時的數據估算培養液中酵母菌的濃度．