Question

5．EPO是促紅細胞生成素（Erythropoietin）的英文簡稱，是一種激素樣物質，可促進體內新紅細胞生成．人類已可通過基因工程合成EPO基因，并采用中國倉鼠卵巢（CHO）細胞表達系統來獲取產物．其過程如下：

請回答下列問題：
（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉錄得到cDNA，再通過PCR技術獲得大量EPO基因．
（2）供體母鼠通常情況下每次排卵8～12枚，為使其超數排卵，需注射促性腺激素 以排出更多的卵子，培養到減數第二次時期與獲能的精子相遇時，精子首先發生頂體反應，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精．
（3）①過程構成了基因表達載體，內部包括不可缺少的組成部分，其中啟動子能驅動基因的轉錄．
（4）采用顯微注射技術，將重組表達載體導入小鼠受精卵中，將受精卵移入發育培養液中繼續培養．培養液成分除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養成分，以及血清等物質．
（5）當胚胎發育至桑椹胚或囊胚時期，向受體移植，為獲得更多個轉基因胚胎，要將內細胞團均等切割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．此外，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲取目的基因的方法可通過反轉錄法，故從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉錄得到cDNA，再通過PCR技術獲得大量EPO基因．
（2）為使供體母鼠超數排卵，需注射促性腺激素以排出更多的卵子，卵子需培養到減數第二次分裂中期時才能與獲能的精子相遇時，精子首先發生頂體反應，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精．
（3）①過程為形成基因表達載體的過程，基因表達載體包括啟動子、終止子等，其中啟動子為RNA聚合酶結合的部位，能驅動基因的轉錄．
（4）將重組表達載體導入動物細胞中常采用顯微注射技術技術．動物細胞培養的培養液成分除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養成分，以及血清（血漿）等物質．
（5）胚胎移植時一般在桑椹胚或囊胚時期，為獲得更多轉基因胚胎，要將囊胚的內細胞團均等切割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．此外，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．
故答案為：
（1）cDNA
（2）促性腺        減數第二次         頂體
（3）啟動子
（4）顯微注射       血清
（5）桑椹胚或囊胚     內細胞團       性別鑒定

點評 本題以“促紅細胞生成素”的合成為題材，考查基因工程和植物細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，識記植物組織培養的原理及應用，能結合題中信息準確答題．