Question

12．人外周血單核細胞能合成白介素2（IL-2）．該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個融合基因，并在酵母菌中表達，獲得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技術流程如圖．請回答：
（1）圖中②表示反（或逆）轉錄過程．
（2）表達載體1中的位點a，應為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構建表達載體2．
（3）表達載體2導入酵母菌后，融合基因轉錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對應的堿基序列不能含有終止（起始、終止）密碼子，才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白．
（4）應用分子雜交技術可檢測酵母菌是否轉錄出IL-2-HAS的mRNA．

Answer 1

分析 據圖分析，①表示轉錄提取信使RNA，②表示逆轉錄形成目的基因，③表示基因表達載體的構建．限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．胚胎移植中受體的子宮不對外來胚胎發生免疫排斥反應，這為胚胎在受體內的存活提供了可能．對囊胚階段的胚胎進行分割時要注意將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發育．

解答 解：（1）圖中②過程mRNA→cDNA，表示逆轉錄過程．
（2）根據目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，表達載體1上已有EcoRⅠ，推測位點a應含有BglⅡ．
（3）融合基因轉錄出的mRNA中與IL-2蛋白對應的堿基序列中不能含有終止密碼，才能成功表達出IL-2-HsA融合蛋白．否則HSA蛋白將無法合成．
（4）應用分子雜交技術可檢測酵母菌是否轉錄出IL-2-HAS的mRNA，應用抗原-抗體雜交技術可檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案為：
（1）反（或逆）轉錄
（2）a
（3）終止
（4）分子  mRNA

點評 本題結合流程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生能夠識記動物細胞培養的條件；識記基因表達載體的組成；明確啟動子和終止子的功能；識記目的基因分子水平檢測的方法等．