Question

13．家蠶細胞具有高效表達外源基因能力．將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規模培養，可以提取干擾素用于制藥．
（1）進行轉基因操作前，需用胰蛋白酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞．
（2）為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達載體的啟動子和終止子之間；若要檢測干擾素基因在家蠶細胞中是否表達，可以采用的方法有分子雜交、抗原-抗體結合．
（3）通過PCR技術可大量獲取目的基因．PCR反應體系主要包括：擴增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和對干擾素基因特異性的DNA引物對．
（4）一般常采用法將干擾素基因導入家蠶的細胞．培養家蠶細胞時，經過和可得到大量的細胞；在培養過程中，家蠶細胞會表現出和特點．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應器中，這樣可以增大細胞貼壁生長的附著面積，增加培養的細胞數量，也有利于空氣交換．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與表達．
2、從分子水平上檢測目的基因的方法：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
3、PCR技術的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）等．

解答 解：（1）動物細胞培養時，需要用胰蛋白酶處理動物組織，以便獲得單個細胞．
（2）基因表達載體包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因，其中啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端．基因表達包括轉錄和翻譯兩個步驟，要檢測目的基因是否轉錄，可采用分子雜交技術，要檢測目的基因是否翻譯，可采用抗原-抗體雜交法．
（3）采用PCR技術大量擴增目的基因時，其體系主要包括：擴增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶（taq酶）和對干擾素基因特異性的DNA引物對．
（4）培養家蠶細胞時，貼壁生長的細胞會產生接觸抑制．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應器中，這樣可以增大細胞貼壁生長的附著面積，增加培養的細胞數量，也有利于空氣交換．
故答案為：
（1）胰蛋白（或膠原蛋白酶）
（2）啟動子 終止子 分子雜交 抗原-抗體結合
（3）TaqDNA聚合酶 對干擾素基因特異性的DNA引物對
（4）增大細胞貼壁生長的附著面積

點評 本題綜合考查基因工程、動物細胞培養、生態工程原理等知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記動物細胞培養的具體過程；掌握生態工程的原理及一般實例，能結合所學的知識準確答題．