Question

【題目】土壤鹽堿化是影響農作物生長的重要環(huán)境因素。某研究小組從鹽堿地某種農作物的根際土壤采樣，篩選鑒定出具有固氮及分泌IAA能力的多功能菌株，并對其鹽堿耐受性進行了測定。回答下列問題：

（1）該小組分離純化固氮菌所用的培養(yǎng)基配方（pH7．0~7．5）如表所示：

KH2PO4	MgSO4·7H2O	NaCl	CaCO3	甘露醇	CaCO4·2H2O	蒸餾水
0．2g	0．2g	0．2g	5．0g	10g	0．1g	1000mL

該培養(yǎng)基無氮源的原因是_________________。該培養(yǎng)基需要添加瓊脂的原因是_________________。

（2）研究人員將菌株接種于添加有色氨酸的牛肉膏蛋白胨（LB）培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)天，測定菌株分泌的IAA量。推測培養(yǎng)基中添加色氨酸的目的是___________________。

（3）為測定菌株的耐鹽堿水平，需在______________不同的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株，每組重復3次。

（4）對土壤樣品______________后涂布平板，可統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在______________的平板進行計數(shù)。

Answer 1

【答案】固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，能在該培養(yǎng)基上生長，而無固氮能力的微生物不能在該培養(yǎng)基上生長，從而起到篩選/分離純化固氮菌的作用 液體培養(yǎng)基不能分離單菌落 為IAA合成提供原料 鹽堿度（鹽/NaCl濃度和pH/酸堿度） 稀釋 30~300

【解析】

1．微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。
2．微生物數(shù)目的間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作a、設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。b、為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

（1）固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，應該選擇無氮培養(yǎng)基分離純化固氮菌。從所用配方來看，培養(yǎng)基是液態(tài)的，而液體培養(yǎng)基不能分離單菌落，所以需要添加瓊脂（凝固劑）。

（2）細胞可以利用色氨酸經過一系列的反應合成生長素IAA。

（3）測定菌株耐鹽堿水平，測試的是鹽和堿兩個因素，因此需在NaCl濃度和pH（酸堿度）不同的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株。

（4）土樣應該稀釋后再涂布平板，以免菌液濃度過高影響分離計數(shù)。為了保證計數(shù)結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。