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下圖質粒x－1含有E1和E2兩種限制酶的識別，Ap^r表示抗青霉素抗性基因，Tc^r表示抗四環素抗性基因，將兩端用E1切開的Tc^r基因與用E1切開的質粒x－1混合連接，連接后獲得的質粒類型不可能是

A．x－1 B．x－2 C．x－3 D．x－4

【答案】

【解析】Tc^r基因的黏性末端是E1限制酶識別序列，不能與E2限制酶切割形成的黏性末端拼接。

練習冊系列答案

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科目：高中生物 來源：2011年普通高等學校招生全國統一考試生物卷（上海） 題型：綜合題

回答下列有關基因工程的問題。
(1)基因工程中使用的限制酶，其特點是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Ap^r表示抗青霉素的抗性基因，Tc^r表示抗四環素的抗性基因。

(2)將兩端用E1切開的Tc^r基因與用E1切開的質粒X－1混合連接，連接后獲得的質粒類型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多選）

A．X－1

B．X－2

C．X－3

D．X－4

(3)若將上圖所示X－1、X－2、X－3、X－4四種質粒導入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環素的兩種培養基上。在這兩種培養上均不能生長的大腸桿菌細胞類型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
(4)如果X－1用E1酶切，產生850對堿基和3550對堿基兩種片段：那么質粒X－2（Tc^r基因的長度為1200對堿基）用E2酶切后的片段長度為＿＿＿＿＿＿＿＿＿對堿基。
(5)若將外源的Tc^r基因兩端用E2切開，再與用E2切開的X－1混合連接，并導入大腸桿菌細胞，結果顯示，含X－4的細胞數與含X－1的細胞數之比為13，增大DNA連接酶用量能否提高上述比值？＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

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科目：高中生物 來源：2011-2012學年山西省高三上學期9月份月考生物試卷 題型：綜合題

（11分）目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質粒，則C表示。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質粒。能形成重組質粒的原因是_______________________________________________________________________

(4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環素的培養基上培養，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是_______，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環素的抗性基因。