Question

圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性核酸內切酶的酶切位點，ampr表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列敘述正確的是(??? )

A．圖甲中的質粒用BamHⅠ切割后，含有4個游離的磷酸基團

B．在構建重組質粒時，可用PstⅠ和BamHⅠ切割質粒和外源DNA

C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA連接酶后可得到1種符合要求的重組質粒

D．導入目的基因的大腸桿菌可在含氨芐青霉素的培養基中生長

 

Answer 1

【答案】

C

【解析】圖甲中的質粒用BamHⅠ切割后，會破壞兩個磷酸二酯鍵，磷酸二酯鍵是由相鄰脫氧核苷酸的磷酸基團和脫氧核糖脫水形成的，因此只含有2個游離的磷酸基團。由于BamHⅠ的切割位點在目的基因的內部，使用它切割外源DNA會破壞目的基因。用PstⅠ和HindⅢ切割質粒后，雖然破壞了ampr基因，但是會保留下neo基因作為標記基因，以備篩選。用PstⅠ和HindⅢ切割外源DNA后，可得到兩個能與質粒連接的DNA片段，但是只有帶目的基因的DNA片段與酶切后的質粒連接才符合要求。由于氨芐青霉素抗性基因遭到破壞，因此，只能用含新霉素的培養基進行篩選。