Question

7．為了調查某城市自來水的水質情況，某研究小組對自來水水樣中的大腸桿菌含量進行了測定，請回答下列問題：
（1）檢測自來水中大腸桿菌的數量，可選用伊紅美藍培養基，伊紅美藍培養基除了為大腸桿菌的生長繁殖提供水和碳源外，還可以提供氮源和無機鹽等基本營養成分．該研究小組在統計菌落數目時，選取菌落數目未定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足而遺漏菌落的數目．
（2）在接種前，該研究小組隨機取若干滅菌后的空平板先行培養了一段時間，結果發現空白對照組的平板上出現了6個菌落，請分析說明可能的原因（寫出兩點）：①培養基滅菌不合格；②倒平板過程被污染（或培養皿滅菌不合格）．若空白平板上無菌落出現，其他三組實驗組平板上菌落平均數為33-35個，這些平板需要在37℃溫度下，pH調至中性或微堿性的條件下培養1-2d．
（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，每次劃線之前都要對接種環進行滅菌目的是殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種．在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是將聚集的菌體逐步進行稀釋，以獲得單個菌落；劃線時落在培養基上共畫了5個區域，則需要6次灼燒接種環．
（4）直接給牲口飲用自來水或河水，牲口易出現腹瀉．在飲水中加土霉素可預防牲口出現大面積腹瀉，但長期大量使用土霉素容易引起大腸桿菌產生抗藥性，這一過程的實質是大腸桿菌種群的抗藥性基因頻率發生了變化．

Answer 1

分析 微生物接種常用的兩種方法：
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落

解答 解：（1）微生物培養基成分應包括水、無機鹽、碳源、氮源等．
（2）為了確定培養基的滅菌是否合格，微生物學實驗一般會設置空白對照：隨機取若干滅菌后的空白平板培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落生成．
（3）接種時接種環需要灼燒滅菌；在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌體的數目逐漸減少，以便得到單個菌落．每次劃線之前及接種之后都要對接種環進行滅菌，因而劃5個區域，則需要6次灼燒接種環．
（4）長期大量使用土霉素容易引起大腸桿菌產生抗藥性，這是人工選擇的結果，實質是大腸桿菌種群的抗藥性基因頻率發生了變化．
故答案為：
（1）氮源和無機鹽     培養時間不足
（2）培養基滅菌不合格   倒平板過程被污染（或培養皿滅菌不合格）   中性或微堿性
（3）殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種將聚集的菌體逐步進行稀釋，以獲得單個菌落    6
（4）抗藥性基因頻率

點評 本題主要考查培養基的制作和微生物的接種方法，意在強化學生對實驗室的微生物的培養的相關知識的理解與掌握．