Question

9．如圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線．圖中tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點．
據圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因．篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素 的培養基上進行．
（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是人乳鐵蛋白基因啟動子．
（3）過程①可采用的操作方法是顯微注射法．
（4）早期胚胎的內細胞團將來發育成胎兒的各種組織，滋養層細胞將來發育成胎膜和胎盤．
（5）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用C（填字母代號）技術．
A．核酸分子雜交  B．基因序列分析  C．抗原-抗體雜交  D．PCR
（6）體外受精主要包括卵母細胞的采集、精子的獲取 和受精等幾個主要步驟．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：圖中質粒包括四環素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因、啟動子、復制原點，以及兩個限制酶切點，并且兩個限制酶切點的位置均在四環素抗性基因上；目的基因上有三個限制酶切點，與質粒對照，共有的是BamHⅠ、HindⅢ．
圖中①表示目的基因導入受體細胞，②表示通過胚胎移植的方式將早期胚胎移植到代孕母牛體內．

解答 解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質粒后，會破壞質粒上的四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養基上進行．
（2）啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列．
（3）過程①是將重組質粒導入受體細胞，當受體細胞是動物細胞時，將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（4）早期胚胎的內細胞團將來發育成胎兒的各種組織，滋養層細胞將來發育成胎膜和胎盤．
（5）由于人乳鐵蛋白發球蛋白質，所以為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原-抗體雜交技術．
（6）體外受精主要包括卵母細胞的采集、精子的獲取和受精等幾個主要步驟．
故答案為：
（1）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素
（2）人乳鐵蛋白基因啟動子
（3）顯微注射法   
（4）胎兒的各種組織     胎膜和胎盤   
（5）C  
（6）精子的獲取

點評 本題結合乳腺生物反應器培育過程圖和曲線圖，考查基因工程、胚胎工程、基因頻率的變化及生物進化等知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術；識記胚胎分割技術的理論基礎，能提取圖中有效信息答題．