Question

紅細胞含有大量血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成。我們可以選用豬、牛、羊等動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關問題：

（1）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。

①其中加入檸檬酸鈉的目的是___________________。

②此過程即是樣品處理，它應包括紅細胞洗滌、___________、分離血紅蛋白溶液。

③洗滌紅細胞的目的是________________________。

（2）收集的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。

①透析的目的是____________________________________________。

②透析的原理是_______________________________________________。

（3）然后通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，最后經SDS—聚丙烯酰胺凝膠電脈進行純度鑒定。其中通過凝膠色譜法將樣品純化的目的是___________________________。

 

Answer 1

1）①防止血液凝固　　　　 ②血紅蛋白的釋放　　　 ③去除雜蛋白

（2）去除相對分子質量較小的雜質 透析袋能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內

（3）通過凝膠色譜法去除相對分子質量較大的雜質

 

（1）檸檬酸鈉是一種抗凝劑，加入檸檬酸鈉可以防止血液凝固；樣品處理包括紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液；洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續步驟的分離純化。（2）透析袋一般是用硝酸纖維素制成的，透析袋能使小分子自由進出，而將大分子保留在袋內，透析可以去除樣品中分子量較小的雜質或用于更換樣品的緩沖液。（3）凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的方法，因此通過凝膠色譜法去除相對分子質量較大的雜質。